缺氧对人胚肺成纤维细胞增殖，Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响及其机制的探讨

发布时间：2020-05-15 22:02

【摘要】：成纤维细胞是结缔组织中数量最多的固有细胞，其增殖及前胶原基因表达等功能状态直接影响损伤修复的结局。缺氧是在损伤修复过程中影响成纤维细胞上述功能的重要环境因素。本文以体外培养的人胚肺成纤维细胞为靶细胞，以缺氧(2％O_2)为刺激因素，从细胞、蛋白分子、mRNA、离子水平探讨了缺氧对人胚肺成纤维细胞增殖，Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响及其机制，为阐明炎症、抗炎、损伤、修复的普遍机制提供实验依据。 一．人胚肺成纤维细胞的培养及鉴定、人胚肺成纤维细胞缺氧(2％O_2)模型的建立及缺氧对该细胞损伤作用的评价 组织块法原代培养人胚肺成纤维细胞，用光镜、透射电镜观察细胞形态、计数细胞接种存活率和免疫细胞化学的方法对所培养的细胞进行鉴定。复制人胚肺成纤维细胞缺氧(2％O_2)模型。用光镜、透射电镜观察细胞形态，琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA完整性，计数细胞接种存活率检测细胞生长状态等指标评价缺氧(2％O_2)对该细胞的损伤作用程度。缺氧(2％O_2)作用下的人胚肺成纤维细胞的光镜下形态、细胞接种存活率无明显改变、电镜下超微结构除内质网扩张外无明显改变、基因组DNA无降解，证实缺
【图文】：

图b1第6代人胚肺成纤维细胞(x100)2.电镜下细胞超微结构电镜下细胞形态如图2，可见细胞胞体轮廓清楚，呈不规则星形且具有许多突起。细胞核为椭圆形，约占胞体的2/3，常染色质较多，核仁明显。细胞质较丰富，内含许多粗面内质网，高尔基复合体和一些游离核糖体。图2人胚肺成纤维细胞电镜下超微结构(X5O00)

阳性对照组人胚肺成纤维细胞株胞浆内弥漫阳性染色，证明抗成纤维细胞表面蛋白单克隆抗体是抗成纤维细胞表面蛋白的特异抗体(图3)a。实验组第6代培养人胚肺成纤维细胞胞浆内弥漫强阳性染色(图3b)。阴性对照组第6代培养人胚肺成纤维细胞胞浆染色阴性(图3)c。此外，在阴性对照组中，，观察到了典型的细胞核分裂相，细胞处于分裂后期，也表明人胚肺成纤维细胞生长状态良好。图3a免疫细胞化学染色:阳性对照组(X400)
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1998
【分类号】：R363

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李淑芬;孙国瑛;周勇;周慧芳;段佳熙;管茶香;;TREM-2对小鼠肺成纤维细胞凋亡的影响[J];国际病理科学与临床杂志;2011年04期

2 陈厚文;郭梦舟;陈琦;吴超;李香龙;范杰;熊志勇;朱孟博;石小玉;;TNF-α和IL-13对人肺成纤维细胞胶原蛋白生成的影响[J];中国细胞生物学学报;2011年06期

3 姚晓雷;张娟;肖永红;;转化生长因子β_1抗体对小鼠肺成纤维细胞增殖及Ⅲ型胶原表达影响[J];中国职业医学;2011年03期

4 莫平征;叶燕青;韩晓;;泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响[J];武汉大学学报(医学版);2011年05期

5 赵诗萌;韩丹;吴红敏;曹美玲;董彦君;薛辛东;;新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞P16-RB-E_2F_1通路的改变[J];中国现代医学杂志;2011年23期

6 郝长付;张光辉;姚武;;秋水仙碱对二氧化硅致大鼠肺成纤维细胞激活效应的抑制作用[J];郑州大学学报(医学版);2011年04期

7 罗玲;杨奕;徐洪;魏中秋;张丽娟;李倩;杨方;;PDGF介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠矽肺纤维化形成中的作用[J];工业卫生与职业病;2011年04期

8 周敏;谈伟君;;硒锰对SiO_2致成纤维细胞DNA损伤拮抗作用[J];中国公共卫生;2011年08期

9 杨秀芳;郑铠军;夏荣华;张汉奎;陈敬国;黄惠娟;陈简;;血清透明质酸和Ⅲ型前胶原氨基端肽对早产儿支气管肺发育不良的预测[J];中国新生儿科杂志;2011年04期

10 范鹏举;杨兴华;肖目张;龙剑虹;雷少榕;;Toll样受体4通过转化生长因子β1参与增生性瘢痕形成的机制研究[J];生物化学与生物物理进展;2011年09期

相关会议论文 前10条

1 杨娜;朱运奎;闫江涛;李继东;;肺成纤维细胞在裸鼠肺癌转移中的作用[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

2 陈晓红;李怡然;;糖皮质激素对IL—13刺激肺成纤维细胞的影响[A];全国第十二届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2011年

3 陈晓红;;IL-13刺激肺成纤维细胞及布地奈德的干预效应[A];转化医学研讨会论文集[C];2010年

4 刘乾;陈琦;蒋涛;王震;闫明霞;许祖德;;瞬时转染SARS-Cov M基因对大鼠肺成纤维细胞生长及功能的影响[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年

5 李杨;宋良文;王德文;彭瑞云;高亚兵;马俊杰;;γ射线对肺成纤维细胞中Smad通路信号转导的影响及其意义[A];第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2005年

6 孙影;孙树勋;杨方;张尚明;;矽肺患者AM介导的肺成纤维细胞c-myc mRNA表达的体外研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

7 王铭杰;罗自强;吕梅;周京林;曹传顶;嫣慧明;岳少杰;;NMDA受体激活介导人胎肺成纤维细胞胶原分泌与降解[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

8 万静;李晨;刘伟;曹生田;陈玉;汪沛;刘惠君;廖晓红;罗自强;;UGBP在Antiflammin-1影响肺成纤维细胞增殖中的作用[A];湖南省首届生理—药理科学青年论坛论文摘要汇编[C];2009年

9 黄莺;孙洁民;;肺纤维化形成过程中大鼠肺成纤维细胞分泌TGF-βmRNA及β-CateninmRNA的表达变化[A];中华医学会第三届全国间质性肺病暨弥漫性泛细支气管炎学术会议论文汇编[C];2010年

10 徐卫华;沈华浩;;成年大鼠肺成纤维细胞的原代培养和鉴定[A];2006年浙江省呼吸系病学术年会论文汇编[C];2006年

相关重要报纸文章 前7条

1 ;古蔺肝苏的抗肝纤维化作用[N];健康报;2006年

2 ;抗肝纤维化治疗期待突破[N];中国医药报;2006年

3 ;穴位贴磁药对肝炎后肝硬化患者肝功能的保护[N];中国中医药报;2005年

4 张元兴邋吴宏忠;从药效学研究认识阿胶(之三)[N];科技日报;2008年

5 闫志安;北京发现抗肝纤维化方剂[N];中国医药报;2005年

6 明园;怎样早期发现骨质疏松[N];大众卫生报;2006年

7 冯世纶;小柴胡汤有何罪[N];中国中医药报;2005年

相关博士学位论文 前10条

1 赵磊;缺氧对人胚肺成纤维细胞增殖，Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响及其机制的探讨[D];中国协和医科大学;1998年

2 郝淑玲;肾上腺髓质素及其受体在肺成纤维细胞中的表达及抗纤维化作用的研究[D];第三军医大学;2012年

3 牟晓燕;芪丹颗粒剂对博来霉素诱导大鼠肺间质纤维化胶原代谢的实验研究[D];山东大学;2006年

4 徐芳玲;汉坦病毒对人胚肺成纤维细胞基因表达及细胞凋亡的影响[D];武汉大学;2004年

5 王铭杰;NMDA受体的激活在高氧暴露后新生大鼠肺损伤和肺泡发育受阻中的作用及机制研究[D];中南大学;2009年

6 李杨;TGFβ_1在放射性肺损伤中信号转导机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

7 岳晓红;高氧致CLD早产鼠p16基因启动子甲基化及其对肺纤维化作用的研究[D];中国医科大学;2008年

8 卢红艳;早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与转分化的研究[D];华中科技大学;2007年

9 谷丽;TGF-β_1/Smads信号转导途径在肺肌成纤维细胞分化中的作用及IFN-γ、地塞米松的影响[D];中国协和医科大学;2005年

10 奚吉成;辛伐他汀干预治疗肺移植术后闭塞性细支气管炎的实验研究[D];中国协和医科大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨娜;肺间质细胞促进H460细胞转移机制的实验研究[D];兰州大学;2011年

2 王卫丽;纤溶酶原激活物抑制剂-1对大鼠胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制[D];河北医科大学;2012年

3 于晓岩;TGF-β1对新生鼠肺成纤维细胞增殖周期的影响及其机制的研究[D];中国医科大学;2010年

4 张光辉;游离SiO_2粉尘体外诱转肺成纤维细胞抑制筛选[D];郑州大学;2010年

5 焦晓丹;IL-1β在肺成纤维细胞表达ICAM-1中的作用研究[D];河北医科大学;2012年

6 冯海利;AcSDKP对TGF-β1/JNK通路的调节在大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成中的作用[D];华北煤炭医学院;2010年

7 席丹丹;干扰Ca~（2+）对TNF-α诱导鼠肺成纤维细胞增殖的影响[D];山西医科大学;2010年

8 孙渊;葛根素对肺成纤维细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响和可能作用机制[D];南京中医药大学;2012年

9 程华;AcSDKP对TGF-β1介导的P38通路调节在大鼠肺成纤维细胞胶原合成中的作用[D];河北联合大学;2011年

10 陈玲玲;凋亡诱导因子在姜黄素诱导的大鼠肺成纤维细胞凋亡中的作用[D];南京医科大学;2011年

本文编号：2665694