金黄色葡萄球菌B型肠毒素单克隆抗体的制备及初步应用研究

发布时间：2020-05-26 00:27

【摘要】：目的 制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素(staphylococcus aureusenterotoxin B, SEB)的单克隆抗体(Monoclonal antibody, McAb)，建立检测金葡菌B型肠毒素的ELISA检测方法，并进行初步的临床应用。 方法 以天然纯化的SEB免疫BALB／C小鼠，采用细胞杂交瘤技术，筛选出抗SEB的McAb，在此基础上建立双抗体夹心ELISA方法，用标准菌株和临床分离株进行评价，并初步应用于烧伤病人血清中SEB的检测。 结果 制备了抗SEB-McAb共六株，其中1C_8、1A_5、1D_1、3D_6分泌的McAb类型为Ig G1，2C_(11)、3A_9分泌的McAb类型为Ig G2a。6株中有4株仅与SEB发生反应，有两株与SEC_1有弱交叉反应，与大肠埃希菌、粪肠球菌、绿脓假单胞菌、腐生葡萄球菌均不发生反应。同时制备了抗SEB多克隆抗体1株。SEB-McAb诱导小鼠腹水纯化后效价为1：12800-1：25600，抗体亲和力常数为5×10~7～2×10~9。Western-blot实验显示出一条特异性条带，位于分子量28.5KDa处，证明了其特异性。用特异McAb建立了双抗体夹心ELISA法检测SEB，其敏感性高，达0.078μg/L，高于目前国内报道的水平。特异性强，重复性和稳定性均较好。双抗体夹心ELISA方法检测临床分离金葡菌肠毒素结果显示，，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)中肠毒素的总带毒率为93.9％，其中B型肠毒素带毒率最高，占检出的53.3％，其次为C型(28.5％)。甲氧西林敏感金葡菌的带毒率仅为28.6％，两者之间差异有统计学意义。重度烧伤病人血清中SEB水平明显高于对照组及轻度烧伤组，差异有统计学意义。 结论 制备了抗SEB-McAb，其效价较高，亲和力较强，特异性强。在此基础上建立双抗体夹心ELISA法检测SEB，灵敏性达0.078μg/L，特异性和重复性均较好，可用于临床分离菌株SEB的检测以及检测烧伤病人血清中的SEB。本方法为临床金葡菌感染的诊断和分型，为阐明SEB的临床意义提供了方法。
【图文】：

图2.1M:蛋白质分子量标准;六株McAb(腹水)的SDS一PAGE分析:ZC一l:2:ICs;3:1凡;4:3A9;5:ID一;6:3D6图2.2单抗的W七stem一blot分析M:蛋白质分子量标准;:ZCll;

单抗的W七stem一blot分析
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 聂晓华;李建东;李焕荣;崔德凤;张莉;;猪传染性胃肠炎病毒S基因A位点蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国兽医杂志;2011年08期

2 韩秀娥;张萍;王雪峰;李萌;魏萍;周建华;尹杰超;;马传染性贫血病毒p26蛋白单克隆抗体的制备[J];中国预防兽医学报;2011年07期

3 王永志;苏颖;米丽娟;付云红;范志强;扈荣良;赵玉民;;山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备[J];中国畜牧兽医;2011年09期

4 石星明;张晶;赵妍;王玫;魏秀英;胡顺磊;全炎铭;闫帅;崔红玉;王云峰;;禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];畜牧兽医学报;2011年09期

5 于杨;崔佳莹;丁晴微;崔鹏飞;李印;邓国华;任涛;陈化兰;;新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备[J];中国畜牧兽医;2011年09期

6 回晶;肖芳;李辉;崔小进;刘宏生;胡风庆;;新型截短肠毒素C2突变株抑制肿瘤细胞生长(英文)[J];生物工程学报;2011年06期

7 李刚;纪宪勇;钱国良;华修德;秦娜;王杰;刘凤权;;抗吡虫啉单克隆抗体的制备及鉴定[J];生物工程学报;2011年06期

8 张璐;刘宁宁;吴海珍;高继明;肖一红;周恩民;;非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B羧基端多肽单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国兽医科学;2011年07期

9 张倩;李晓霞;董昕欣;顾小雪;曹振;邓小雨;胡冬梅;刘奇;周智;遇秀玲;翟新验;田克恭;;猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定[J];中国比较医学杂志;2011年09期

10 姜金庆;张海棠;范国英;马金友;王自良;王建华;;19-去甲睾酮单克隆抗体的筛选及icELISA方法的建立[J];科学通报;2011年20期

相关会议论文 前10条

1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年

4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年

7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年

9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年

10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

相关重要报纸文章 前10条

1 文来;2010年单克隆抗体市场有望扩三倍[N];中国医药报;2005年

2 庄愉;单克隆抗体异军突起[N];医药经济报;2003年

3 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年

4 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年

5 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年

6 记者 马波;滇将建首家单克隆抗体基地[N];科技日报;2000年

7 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年

8 探微;单克隆抗体技术在中药研究中的应用初探[N];中国医药报;2006年

9 毛文波;单克隆抗体：征服癌症的新方法[N];科技日报;2004年

10 劳云信;单克隆抗体 抗击肿瘤的生力军[N];中国医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年

2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年

3 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年

4 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年

5 秦迎松;人促血液血管细胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年

6 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年

9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 冯亚军;动物源金黄色葡萄球菌耐药性检测及其肠毒素A基因的克隆表达及单克隆抗体的制备[D];扬州大学;2009年

2 龙军;金黄色葡萄球菌B型肠毒素单克隆抗体的制备及初步应用研究[D];第一军医大学;2004年

3 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年

4 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年

5 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年

6 郑杰;分泌抗猪流感病毒（河南株）单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年

7 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年

8 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年

9 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2，3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年

10 贾娟娟;抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年

本文编号：2680979