细菌裂解物的免疫调节作用

发布时间：2020-05-26 04:59

【摘要】：感染性疾病对人类的困扰仍很严重，而且抗生素在感染性疾病治疗过程中有一定局限性，因此，免疫调节剂成为感染性疾病防治研究的热点。细菌的包被含有众多的抗原决定簇，是很好的免疫调节剂，国外已开发出相应的细菌裂解物免疫调节剂。本文在国外研究的基础上进行优化制备双歧双歧杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的细菌裂解物，研究它们各自的以及复合后的体内外免疫调节作用。本文采用化学酶解法制备双歧双歧杆菌完整肽聚糖(Bb_(WPG))，采用超声破碎法制备双歧杆菌裂解物(Bb_(BL))、肺炎链球菌裂解物(Sp_(BL))、流感嗜血杆菌裂解物(Hi_(BL))，采用酶解法制备金黄色葡萄球菌裂解物(Sa_(BL))。淋巴细胞转化试验结果表明Bb_(WPG)、Bb_(BL)、Sa_(BL)、Bb_(WPG)+Sa_(BL)、Bb_(BL)+Sa_(BL)、Bb_(WPG)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)、Bb_(BL)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)刺激细胞免疫功能。结果显示，Bb_(WPG)浓度从0.07g／L增至2.25g／L均未见有明显的淋巴细胞增殖；Bb_(BL)浓度达到0.71g／L就可明显刺激T淋巴细胞增殖；Sa_(BL)的浓度为0.012g／L可以明显刺激淋巴细胞产生增殖作用，而且随着浓度的升高，刺激作用不断增强，浓度达到0.195g／L时刺激作用最强；40％Bb_(WPG)+60％Sa_(BL)组合浓度从0.008g／L到0.5g／L都可明显刺激淋巴细胞的增殖作用，其他组合可产生明显的抑制T淋巴细胞增殖作用；60％Bb_(BL)+40％Sa_(BL)组合浓度从0.019g／L到1.250g／L都能明显刺激T淋巴细胞增殖，70％Bb_(BL)+30％Sa_(BL)组合浓度从0.156g／L到1.250g／L也都能明显刺激T淋巴细胞产生增殖作用，其他组合不能刺激T淋巴细胞产生增殖作用；浓度为0.045g／L到1.45g／LBb_(BL)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)复合物95％(40／42)试验组可产生明显刺激T淋巴细天津医科大学硕士学位论文胞增殖作用，具有统计学意义(p0.01):浓度为0.045留L到1 .459/L BbwPG +SaBL+SPBL+HIBL复合物有36%(13/36)的试验组可产生明显刺激T淋巴细胞增殖作用，具有统计学意义(PO.05)。溶血空斑试验检测BbwPG、BbBL、 saBL、BbBL+saBL+spBL+HioL、BbwoG+SaB:+spBL+HieL刺激机体产生抗体形成细胞的能力。0.289/L的BbwPG和0.709/L的BbBL均能明显刺激小鼠机体产生抗体形成细胞，通过标准化计算BbwPG刺激小鼠产生抗体形成细胞的能力优于BbBL;0.1岁L的SaBL可明显刺激小鼠产生抗体形成细胞;1 .459/L 的BbBL+s助L+s伽L+HIBL复合物(BbBL:saoL:spBL:HIBL=6.25:6.25:1:1，克/克)就可明显刺激小鼠机体产生抗体生成细胞;1.459/L的 Bboo+S鲍L+spBL+HIBL复合物(Bboo:s如L:SpBL:HisL=8.33:12.5:2.33:1，克/克)可明显刺激小鼠机体产生抗体生成细胞。动物实验表明 Bb*o+SaoL+spBL+HIBL复合物和BbBL+saBL+SpBL+HIBL复合物对小鼠的细菌感染具有保护作用。小鼠经0.ZmL浓度为1.459/L的Bb*o+S如L+S如L+HIBL 复合物两次免疫后，大肠埃希菌感染小鼠存活率为60%，金黄色葡萄球菌感染小鼠存活率为91.7%(P(0.05或p0 .01，均与对照组比较):小鼠经0.ZmL 浓度为1.459/L的BbBL+saBL+SpBL+HieL复合物两次免疫后，大肠埃希菌感染小鼠存活率为70%，金黄色葡萄球菌感染小鼠存活率为72.7%(p0 .01，均与对照组比较)。小鼠经上述两种复合物免疫后在细菌攻击前未见有明显的不良反应。细菌感染保护实验结束后，取小鼠脾脏、肝脏组织做常规病理检查。结果显示上述两种复合物免疫小鼠后，都可增强脾脏的免疫功能，使肝脏的炎症得到一定程度的局限。两种复合物病理检查结果无明显差异。此外，MTT法检测BbwPG和BbBL在体外对结肠癌细胞株HT-29细胞和 THe一5905细胞的直接抑制作用。结果显示，，50一200mg/L的Bboo对HT-29 细胞有直接抑制作用，最大抑制率为19%，50一20Om留L的BbBL对HT-29细天津医科大学硕士学位论文胞也有直接抑制作用，最大抑制率为48.5%;BbwPG和BbBL对THC一8908细胞无直接抑制作用。我们的实验结果证实，最佳组合的细菌裂解物复合物有较好的免疫调节作用。动物实验进一步验证其有对细菌感染确实有保护作用。而且，复合物中的BbwPG和BbBL还有一定的抑制肿瘤细胞作用。本文结果为将来细菌裂解物能成为免疫调节剂奠定了基础。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【引证文献】