细胞因子在登革病毒感染人皮肤成纤维细胞中的作用

发布时间：2020-05-26 05:45

【摘要】：目的：以人皮肤成纤维细胞作为靶细胞，了解人皮肤成纤维细胞和细胞因子在登革病毒原位组织感染和致病中的作用，为探讨登革病毒感染的发病机理并指导临床治疗提供科学依据。 方法：实验的第一部分采用胰酶和胶原酶联合消化培养法培养人皮肤成纤维细胞，选择合适的条件进行体外培养并用免疫组织化学法鉴定：第二部分用DV_2感染HSF后，在不同时间(4h、8h、24h、48h、72h、96h)收集感染上清，用甲基纤维素微量病毒空斑法测定病毒滴度(pfu／ml)，用间接免疫荧光法观察登革病毒抗原阳性细胞，在透射电镜下找病毒颗粒；第三部分中分别用高、中、低浓度的IL-6、TNF-α、GM-CSF单独作用于DV_2感染HSF的不同环节(病毒吸附时和病毒吸附后)于感染后的不同时间(24h、48h、72h、96h)收集感染上清，测病毒滴度(pfu／ml)；第四部分将HSF接种于24孔板中，DV_2吸附2h后，于感染后不同时间(6h、24h、36h、48h、72h)收集感染上清，，同时做阴性对照，用ELISA法定量测定IL-6、TNF-α的含量。 结果：1．用胰酶和胶原酶联合消化在体外可成功培养出人皮肤成纤维细胞，消化的皮肤成纤维细胞接种24h内贴壁，免疫组织化学法显示为成纤维细胞。2．病毒感染后12h即可在培养上清中测出病毒，病毒滴度48h达到高峰，以后下降。用间接免疫荧光法检测登革病毒抗原阳性细胞，以48h荧光阳性细胞多，胞浆内出现很强的荧光。在光镜和电镜下，感染细胞均未见明显的形态和结构改变，电镜下在感染细胞胞浆里找到具有致密核心的可疑病毒颗粒。3．登革病毒感染能引起成纤维细胞产生IL-6的水平明显增高。4．在病毒吸附时中浓度的IL-6能显著提高病毒产量；在病毒吸附时和病毒吸附后高浓度的TNF-α能抑制病毒的产量。 结论：登革病毒在体外能稳定地感染人皮肤成纤维细胞表明成纤维细胞很可能是蚊叮咬后在原位组织中首先支持登革病毒感染的细胞之一；细胞因子在登革病毒感染人皮肤成纤维细胞的致病和免疫过程中起重要作用。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R373

【参考文献】

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本文编号：2681373