高效液相离子交换色谱在肠致泻性大肠杆菌分类分析中的应用研究

发布时间：2020-05-27 05:53

【摘要】：本文通过高效液相离子交换色谱(HPIELC)和激光光散射仪联用的分离－检测系统研究肠致泻性大肠杆菌的色谱行为，旨在发展一种能适用于临床诊断和流行病学调查的快速分离、检测和鉴定致病菌的新方法。文中首先对色谱条件进行了优化，确定对肠致泻性大肠杆菌表征的最佳色谱条件和检测方法。在此条件下，肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)有其各自的特征性图谱：EPEC的各主要血清型菌种(除E.coli O125:H-外)均表现为一个穿透峰和一个洗脱单峰、洗脱峰保留时间介于16min－19min；EIEC的各主要血清型菌种均只表现为一个尖锐而对称的洗脱峰，色谱保留时间介于22min－25min。接着从两个方面探讨了造成EPEC和EIEC色谱行为不同的原因。1.通过静态、动态的吸附实验，比较了离子交换树脂对EPEC和EIEC的吸附容量，排除了EPEC的穿透峰是由树脂对细菌吸附过饱和引起的可能性；收集EPEC穿透峰、洗脱峰的菌样进行显微镜镜检、菌峰再培养后的重色谱表征、生化药敏实验、透射电子显微镜观察、去除菌体鞭毛后的色谱表征等实验证实了EPEC的穿透峰是由鞭毛引起的。2.通过对EPEC、EIEC菌体的全细胞脂多糖SDS-PAGE电泳分析和测定EIEC、去除鞭毛后EPEC的疏水性实验表明：EPEC和EIEC洗脱峰保留时间的差异是由脂多糖通过影响菌体与树脂间的静电作用和疏水作用造成的。对各种不具有鞭毛的志贺氏菌进行色谱表征，均未发现穿透峰。这进一步验证了穿透峰是由鞭毛引起的。同时志贺氏菌缺失O－多糖链后保留时间延长，其中宋内氏志贺氏菌迟5min左右、福氏志贺氏菌2a型迟3min左右，进一步表明脂多糖是影响细菌色谱行为的关键因素。将10株经生化、血清学试验鉴定均为O157大肠杆菌的菌株进行色谱表征，与标准株的色谱图对照，发现其中编号为PC029和NS283的菌株表现出异常的色谱行为。经PCR验证，结果表明这两株并非O157大肠杆菌。实验表明，EPEC、EIEC、E.coli O157:H7、志贺氏菌有其各自的色谱特征图谱，鉴于此，本研究成功地分离了EPEC和EIEC的混合样品以及EIEC和志贺氏菌的混合样品。以上结果表明，HPIELC可作为“指纹图谱”应用于细菌的分类鉴定、分离纯化，而且为判断细菌动力、抗原变异提供一种快速、灵敏、适用的新手段。
【图文】：

示意图,示意图,细胞,亚细胞成分

图 1-1 FCM 主要原理示意图胞术的主要原理如图 1-1 所示。简要的说，即制备合中的细胞以很高的流速通过光照区，其产生的光学或接受，并测得细胞或亚细胞成分的重要生物学性质，的信号被定量分析[8-9]。胞术与其它细胞分析技术相比具有如下特点：1.高速5000 个细胞；2.高灵敏度，每个细胞只要带有 1000～出，两个细胞之间有 5％的差别就可区别出来，光散精度，在细胞悬液中测量细胞，比其它分析技术的变；4.高纯度，分选细胞的纯度可达 99％以上；5.多参定量检测 DNA、RNA 等多个参量；6.在适当的条件下，分析和分选。代初期，，FCM 在动物细胞的应用研究发展迅速，但碍在微生物学领域取得进展。直到 1979 年，Steen 小组

场流,分离原理,分离法

递链后的细菌进行了表征。2000 年以来，以 Arm把高效毛细管电泳引入到微生物分离的应用领域的病原菌，快速分析消费商品中的微生物组成以活率[33-34]。这些研究都表明，对于细菌的研究毛效的分析手段，也进一步说明了不同微生物在表泳法的分离模式有限，不能根据细菌细胞的多种更重要的是毛细管电泳法难以筛选和回收用于进的细菌活细胞。离技术化性是细菌对化学物质的反应，具有这种趋化性度下得到分离，然而对于运动型非趋化性细菌的(Field-flow fractionation，FFF)可有效解决这
【学位授予单位】：福州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R378

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