孕酮单克隆抗体自包被固相放射免疫分析法的建立及其应用
发布时间:2020-05-30 13:25
【摘要】: 类固醇激素—孕酮(P_4)在雌性动物生殖与妊娠维持过程中起着重要的作用。 体液孕酮含量的测定,可用于早期妊娠诊断、不孕症诊断、发情鉴定、卵巢机能、 繁殖障碍和产科疾病的研究;还可用来检查人工授精效果,进行激素试验,为遗 传分析提供有效的生理指标等。 目前国内对P_4的研究主要是采用液相放免分析法(~3H-P_4)以及酶免疫分析法 (EIA),但前者会产生需要进行特殊处理的废液,后者测定结果不够稳定,在实 际应用中都存在一定问题。 本研究建立了一种运用孕酮单克隆抗体自包被固相放免分析法(Self-coating RIA Using Progesterone Mono-clonal Antibody,Sc-RIA)其灵敏度为0.06nmol/L, 回收率达95.73%,批内CV6.8%,批间CV9.3%,与DPC有非常好的相关性。在 研究中用90%乙醇作为固相样品-滤纸的抽提剂,得到滤纸样品中的~3H-P_4和~(125)I- P_4回收率分别为95.01±0.80%和94.09±3.03%。按照Cerceo提出的“效点系统 打分法”中的五项指标,对所建立的Sc-RIA方法进行评价,得分为31分(得分 在28分以上为较优)。说明Sc-RIA可行、可靠。 应用所建立的Sc-RIA,测定了正常发情奶牛,配种后怀孕奶牛和卵巢疾病奶 牛奶清和滤纸样品中的孕酮含量的变化,结果表明奶清样中的孕酮变化和滤纸样 中的孕酮变化趋势一致。正常奶牛发情周期中,奶清样与滤纸样孕酮的相关系数 r=0.8792±0.070,且测得周期天数完全一致,为22±2.18天。两者于同一天达到 谷点,在谷点处,,滤纸样孕酮和奶清样孕酮的平均浓度分别为1.6481± 0.6023nmol/L和0.3184±0.2549nmol/L。配种后奶牛滤纸样与奶清样孕酮变化趋 势一致,其相关系数为0.9178±0.0053。卵巢疾病奶牛奶清样和滤纸样孕酮变化 的相关系数为0.62。 Sc-RIA可于奶牛早期妊娠诊断。用奶清样测孕酮含量进行早期妊娠诊断,妊 娠诊断准确率达89.47%,未孕诊断准确率达100%。用滤纸样测定牛奶中的孕酮 含量进行早期妊娠诊断,妊娠诊断准确率达87.61%,未孕诊断准确率达95.47%。 Sc-RIA还可用于监测奶牛的发情、排卵、黄体功能等各种繁殖生理状态,从 而进一步地提高奶牛的繁殖率,提高牧场的经济效益。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392
本文编号:2688193
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392
【引证文献】
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1 韩慧;葛根素对小鼠血清中激素含量和乳腺组织中受体表达量的影响研究[D];内蒙古农业大学;2011年
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