编码一个新的人活化B淋巴细胞分化抗原5C5的部分cDNA克隆及核苷酸序列的测定

发布时间：2020-06-03 08:49

【摘要】：白细胞分化抗原(CD)是人血细胞上一组抗原决定簇，是当代生命科学研究的前沿领域之一。自1982年以来，已召开了五届人类白细胞分化抗原国际会议，并已命名了130多个CD。在这些CD中，特异地表达于B细胞的不多，其中仅表达于活化B细胞者尤少。我们曾经报道了表达于人活化B细胞的分化抗原5C5。 为了确认5C5抗原是否是一个新的分化抗原，及进一步研究它的结构和功能，我们用本实验室制备的单克隆抗体5C5制备亲和层析柱，从本实验室建立的人活化B细胞株3D5细胞的膜蛋白质中分离、纯化到相应的分化抗原5C5，并用该抗原免疫小鼠，经多次克隆，筛选到一个杂交瘤细胞株5C5-G1。它所分泌的单抗与单抗5C5识别同一分化抗原。Westernblot印迹分析显示，该分化抗原在SDS-PAGE(还原条件下)中有五条带，分子量分别为92KD、52KD(二条)、40KD和20KD。免疫沉淀显示92KD和52KD两条带。流式细胞仪分析表明，单抗5C5-G1和单抗5C5识别的分化抗原表达于相同的细胞，即人活化B细胞和人活化B细胞株3D5(强阳性)、和Daudi(弱阳性)，而在静止B细胞、活化T及静止T细胞、单核细胞、以及T细胞株CEM、Jurkat和Peer没有表达，在K562细胞上也没有表达，，在U937细胞上仅有极弱的表达。 用单抗5C5-G1和单抗5C5的混合物分别从人扁桃体细胞λgt11cDNA文库和3D5细胞λgt11 cDNA文库中筛选到3个和7个阳性克隆。把从扁桃体细胞cDNA库所得阳性克隆的cDNA插入到质粒pUC18中，用双链双脱氧测序法完成了核苷酸序列分析，其中一个长613bp，另外二个长467bp，后者与前者的前467bp完全重叠。613bp cDNA中有一个开放阅读框架，从103bp到429bp，共327bp。Northern blot分析显示，此613bp cDNA与人扁桃体和3D5细胞的RNA在2.0Kb
【图文】：

305细胞膜蛋白亲和层融合后的细胞共有438IsA法筛选出分泌抗小鼠析表明，这107个孔中有CEM细胞不反应，但反流式细胞仪分析图。t0rnb}。t分析，发现其应图与单抗5C5的反应获得了一个新的杂交瘤均与还原条件下3D5细胞9ZKD、52Kn(两条)、40、了力1一

腹水和抗CD3单抗腹水与它们则没有反应(图2)。另外单抗5C5一G.和单抗55c与3D5细胞膜蛋白的免疫沉淀物在还原条件下经SDS-PAGE和放射自显影亦均显示9ZKD和52【D两条蛋白带(图3)。这些结果表明，单抗5CS一引与单抗55c识别人活化B细胞株3D5细胞膜上相同的分子。一92KD一SZKD奋图3，仍细胞膜蛋白免疫沉淀放射性自显影F19.5AutoradiograPhyoftheProtelnson五DSeollmembraneimmunoPreeipitatedbyMeAb5C5orMeAb5C5一G一12，I一laboled5D5eelLmembraneProteinswerepreeiPitatedbyMeAb5C5(a一redueing，b一nonredueing)orMeAb5C5一6，(e一rodueing，d一nonredueing).ThePreeiPitatedProleinswere5ePeratedonSDS一PA6EandautoradiograPhiealtyanatyzed呼4.2单抗5c5和单抗5C5一G.识别的分化抗原表达于活化B细胞表面间接免疫荧光染色流式细胞仪分析显示(表3)，正常人外周血B淋巴细胞、T淋巴细胞和单核细胞表面均不表达单抗5C5和单抗5C5一G:识别的分化抗原(称为5C5)
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1995
【分类号】：R392

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本文编号：2694583