重要致病性暗丝孢科真菌分子生物学研究

发布时间：2020-06-04 10:46

【摘要】：(一) 暗丝孢科真菌是一大类形态结构复杂而具特征性，目前只发现无性阶段的丝孢纲真菌。多数腐生，少数对人和动物致病。对人类致病的主要病原体为裴氏着色真菌、紧密着色真菌、卡氏枝孢霉、疣状瓶霉、皮炎瓶霉、甄氏外瓶霉，可引起着色芽生菌病、暗丝孢菌病或真菌性足菌肿。长期以来暗丝孢科真菌的分类、鉴定和命名一直甚为混乱，被称为病原真菌分类学中的头号难题。关键在于人们对该科真菌各种属间的系谱格局认识不清，，难以形成可靠的自然分类体系。本文采用白念珠菌等18种真菌18S rDNA共有的一段24bp序列(GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC)作引物，对上述6种30株重要致病性暗丝孢科真菌基因组DNA进行随机扩增。反应体系和扩增条件为：在总体积30μl的反应体系中，含10×PCR缓冲液、MgCl_2(25mmol／L)、dNTPs(各2.5mmol／L)各3μl，模板DNA(50ng／μl)、引物(25μmol／L)及Taq DNA聚合酶(1u／μl)各1μl。以DNA热循环仪先在低退火温度下扩增二个循环：94℃ 3min、40℃ 2min、72℃ 2min；然后再以高退火温度扩增35个循环：92℃ 45sec、55℃ 45sec、72℃ 2min，72℃继续延伸5min后，以1.2％琼脂糖凝胶电泳、紫外线下观察并照相。对扩增出的多态性图谱，采用数值表相学方法分析，以各运筹分类单位对偶间的最小曼哈顿距离表值为指标，获得了表相图。简单示之为{P.verrucosa[(F.pedrosoi F.compacta) W.dermatitidis][E.jeanselmei C.carrionii]}，其种内差异小于种间、种同差异小于属间。采用薄层扫描方法对上述6种30株重要致病性暗丝孢科真菌可溶性全细胞蛋白单向SDS-PAGE图谱结合基型趋异方法进行分析，得出其系谱格局为{[P.verrucosa(F.pedrosoi F.compacta)]W.dermatitidis [E.jeanselmei C. carrionii]}。显示出F.pedrosoi和F.compacta、Fonsecaea和Phialophora、以及E.jeanselmei和C.carrionii间的密切关系。这一结果为最终形成暗丝孢科真菌自然分类体系并达到命名的统一提供重要
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1996
【分类号】：R379

【参考文献】