胎肝基质细胞诱导胚胎干细胞体外造血分化的研究

发布时间：2020-06-11 03:06

【摘要】： 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ES细胞)体外能够产生多系造血细胞，但迄今尚未发现其正常分化能产生长期培养启动细胞(Long-Term Culture-Initiating Cell,LTC-IC)。首先，从交配期3.5天(days postcoitus,dpc)C57BL／6J小鼠囊胚的内细胞团中分离ES细胞并通过体外维持培养建立了ES细胞系MES-1。MES-1在体外间断传代32代，具有ES细胞的基本特征。体外能分化形成拟胚体(embryoid body,EB)，，在正常和裸小鼠体内具有形成畸胎瘤的能力。其次，以转染pSV)340neo质粒的方法建立了永生化12.5dpcC57BL／6J小鼠胎肝基质细胞系A4和B3，并采用有限稀释分析(limited dilution analysis,LDA)和长期培养集落形成细胞(long-term culture-colony forming cell,LTC-CFC)分析方法研究胎肝基质细胞系对骨髓来源的LTC-IC的维持和扩增的影响。A4和B3体外传代超过22代没有出现细胞危机现象。A4为成纤维样细胞，高表达UEA-1、CD29、CD44，低表达CD105；B3为上皮样细胞，高表达CD105、CD29、CD44，低表达UEA-1。A4、B3体外均能维持骨髓来源的LTC-IC至少4周，其中B3具有明显的扩增功能；造血相关因子SCF+IL-3+IL-6+Epo对LTC-IC的维持和扩增没有影响，但与不同的基质细胞协同作用影响LTC-IC的增殖潜能。基于上述实验结果，采用三步法研究胎肝基质细胞B3对MES-1造血分化的影响并检测第四周时LTC-IC的存在。结果表明7天的EB细胞与B3共培养，CFC总数第一周时减少，至第三周时达到高峰；第4周时的增殖细胞中包含LTC-IC，但LTC-IC多数只能产生CFU-GM。结论：建立的C57BL／J小鼠胎肝基质细胞系B3体外能够有效扩增骨髓来源的LTC-IC，可能在12.5dpc小鼠胎肝造血微环境中以功能性成分起作用的，造血相关因子SCF+IL-3+IL-6+Epo在本长期培养体系中主要调节定向造血祖细胞的增殖和分化、提高LTC-IC的增殖潜能；7天的EB细胞与B3共培养，增殖细胞群体中包含不同分化期的细胞，可能是它们与3天EB条件培养液共同作用诱导未分化的ES细胞分化产生LTC-IC；在本培养体系中，B3参与构建EB细胞或ES细胞增殖分化以及维持LTC-IC的微环境。
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R329

【参考文献】