mTOR通过调控转录因子c-Fos而影响TLR诱导的Th1反应的机制和功能研究

发布时间：2017-03-27 17:17

  本文关键词：mTOR通过调控转录因子c-Fos而影响TLR诱导的Th1反应的机制和功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：尽管IL-12在诱导Th1和CTL细胞免疫应答中起着非常关键的作用,但单独用TLR配体刺激DC和巨噬细胞时,只能诱导少量的IL-12表达,表明其表达水平受着严格的调控。通过本项研究,我们发现并阐述了TLR诱导IL-12表达,促进Th1应答的新机制。我们通过筛选蛋白磷酸激酶的小分子抑制剂库,发现了一些参与调节LPS诱导IL-12表达的蛋白激酶。通过进一步的研究,我们发现PI3K,ERK和m TOR是在天然免疫细胞中调节IL-12和IL-10的表达,从而调控机体的Th1免疫反应的关键激酶。此外,我们发现这些激酶都控制TLR诱导转录因子c-Fos的表达,而c-Fos直接参与调节LPS诱导的IL-12和IL-10的表达调控。c-Fos通过与NF-κB相互作用,影响NF-κB与IL-12和IL-10启动子的结合效率,因此在转录水平上调控IL-12和IL-10等基因的表达。而且,利用m TOR的抑制剂Rapamycin作为佐剂,可以有效地提升乙肝和丙肝疫苗的效果。总之,这些结果表明m TOR通过调控c-Fos,进而调控TLR诱导的IL-12和IL-10表达,影响疫苗诱导的Th1免疫反应。
【关键词】：IL-12 mTOR Toll样受体 c-Fos Th1免疫反应
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 综述8-15
• 1.1 TLR信号通路简述8-9
• 1.2 TLR与适应性免疫反应9-10
• 1.3 IL-12 与TH1 免疫反应10-11
• 1.4 IL-12 的表达调控11-12
• 1.5 转录因子C-FOS和免疫信号调控12-13
• 1.6 MTOR与TLR信号通路13-14
• 1.7 TLR信号在疫苗研发中的作用14-15
• 第二章 材料和方法15-34
• 2.1 实验材料15-17
• 2.1.1 小鼠15
• 2.1.2 实验试剂15-17
• 2.2 实验仪器17-18
• 2.3 实验方法18-34
• 2.3.1 骨髓来源的巨噬细胞的制备18-19
• 2.3.2 骨髓来源的树突状细胞的制备19-20
• 2.3.3 腹腔巨噬细胞的制备20
• 2.3.4 RNA样品的制备20-21
• 2.3.5 细胞总蛋白的制备21-22
• 2.3.6 酶联免疫吸附实验样品的制备22
• 2.3.7 RNA的提取22-23
• 2.3.8 反转录PCR23
• 2.3.9 实时荧光定量PCR23-24
• 2.3.10 ELISA检测细胞因子分泌量24-25
• 2.3.11 细胞的胞质分离技术25
• 2.3.12 蛋白质免疫共沉淀25-26
• 2.3.13 双荧光素酶报告基因实验26-27
• 2.3.14 WESTERN BLOT检测蛋白表达量27-29
• 2.3.15 染色质免疫共沉淀29-32
• 2.3.16 用不同佐剂与鸡卵白蛋白抗原肽免疫小鼠32
• 2.3.17 用不同佐剂与乙肝病毒表面抗原免疫小鼠32-33
• 2.3.18 用不同佐剂与丙肝病毒E2 蛋白免疫小鼠33
• 2.3.19 数据分析处理与作图33-34
• 第三章 实验结果34-46
• 3.1 筛选参与TLR调节IL-12 表达和TH1 反应的蛋白激酶34-35
• 3.2 蛋白激酶PI3K、ERK和MTOR参与LPS诱导的IL-10 表达35-37
• 3.3 RAPAMYCIN，，WORTMANNIN和U0126 通过抑制MTOR信号调节IL-12/ IL-10表达37-39
• 3.4 C-FOS通过调节NF-ΚB的活性来调控TLR诱导的IL-12 和IL-10 表达39-40
• 3.5 MTOR和C-FOS调控TLR信号诱导的基因表达40-42
• 3.6 用RAPAMYCIN能增强TLR诱导的抗HBV TH1 反应42-44
• 3.7 用RAPAMYCIN+MPL作为佐剂能显著增强HCV疫苗的保护效果44-46
• 第四章 讨论46-48
• 参考文献48-53
• 硕士阶段已发表和待发表的文章53-54
• 致谢54-56

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1 何丽;mTOR通过调控转录因子c-Fos而影响TLR诱导的Th1反应的机制和功能研究[D];苏州大学;2015年

  本文关键词：mTOR通过调控转录因子c-Fos而影响TLR诱导的Th1反应的机制和功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：270756