庆大霉素损伤后前庭上皮细胞增殖调亡信号转导机制的研究

发布时间：2020-06-14 15:49

【摘要】： 前庭毛细胞损伤是引起前庭系统疾病的重要原因之一。如何促进前庭细胞损伤后的修复已成为治疗前庭疾病的关键所在。阐明哺乳动物前庭毛细胞凋亡与再生的信号转导机制必将为前庭疾病的治疗提供可靠的理论依据，对于听力疾病的治疗同样具有借鉴意义。目的观察慢性庆大霉素中毒后豚鼠前庭上皮的损伤和修复过程，探讨前庭毛细胞凋亡和再生的关系；研究庆大霉素慢性损伤后豚鼠前庭终器蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）Cα、Cβ亚型的表达和蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）活性的变化及其β_Ⅰ、β_Ⅱ、γ 亚型的表达，探讨PKA、PKC与前庭损伤修复的关系；方法 1．采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine tripho- 第四军医大学硕士学位论文 sPhate nick end labeling，TUNEL）法观察前庭感觉上皮细胞的凋亡，－采用5－澳脱氧尿核苦恤romodeoxguridine，Brdu）免疫细胞化学法观察前庭上皮的修复过程。 2．采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球囊斑和壶腹值 PKAC a、 C6亚型的表达变化及分布特点。 3．采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球羹斑和壶腹峪PKC p Y亚型的表达变化及分布特点；应用℃ YI示踪检测前庭终器 PKC活性的变化。结果 1．对照组中均未观察到TUNEL和Brdu阳性细胞。停止庆大霉素注射后id至3Wb均可观察到TUNEL阳性细胞，但M组阳性细胞数量最多，而后逐渐减少，3Wb仍有阳性细胞存在，阳性细胞主要位于毛细胞层。停止庆大霉素注射后 N组支持细胞层和毛细 “胞层均有Brdu标记阳性细胞，3d组支持细胞层阳性细胞显著增多， lwk组毛细胞层也出现较多阳性细胞，Zwk组 Brdu标记阳性细胞主要位于毛细胞层，3wb仍可观察到Brdu标记阳性细胞。 2．PKC DI，l、Y亚型在前庭感觉上皮细胞均呈阳性表达，上皮下结缔组织呈阴性表达。引、Y亚型较p；亚型表达稍弱，不同亚型抗原分布不完全相同。与对照组相比，PKC p；、Y在停止注射庆大霉素后u其表达明显减弱，随后其表达逐渐增加，至Iw其表达已高于对照组，3w仍未恢复。PKC p n表达各组变化不明显。豚鼠前庭终器PKC活性检测结果与PKC pI、Y表达变化规律基本相似。 3．PKA C a亚型在前庭感觉上皮细胞呈不均匀表达，静纤毛及表皮板呈强阳性表达，胞浆呈弱阳性表达，在 ZWk、3 Wb ＄圆囊斑静纤毛排列逐渐恢复整齐，长度变长，但表达减弱，明显低于对照组：P KAKACp亚型在对照组呈弱阳性表达，庆大霉素损伤后Zwk、 3 Wb核膜表达明显增强。各组内椭圆囊斑、球囊斑和壶腹峪表达结果大致相似。 4 第四军医大学硕士学位论文结论－1．慢性庆大霉素耳中毒后豚鼠前庭上皮细胞凋亡增加，凋亡与增殖伴随存在，前庭上皮细胞的凋亡可能是其增殖的触发因素。增殖过程表现为支持细胞增生向毛细胞增生移行的趋势，支持细胞增殖并转化成毛细胞可能是前庭上皮细胞损伤修复机理之一。 2．庆大霉素慢性中毒后豚鼠前庭感觉上皮PKC p；、Y亚型表达及PKC活性均发生变化，且不同亚型抗原分布不完全相同。提示 PKC在前庭感觉上皮损伤修复过程中发挥重要作用，不同亚型可能具有不同的作用。 3．停止应用庆大霉素 Zwk、3wb PKA C a、C p表达发生变化，提示 PKA C a、C p与前庭毛细胞的增殖分化有关系，PKA C 6可能具有促进增殖分化效应，而 PKA C a亚型可能与抑制增殖分化有关系。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R361.3

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