人工皮肤种子细胞体外分离、培养及鉴定的实验研究

发布时间：2020-06-17 02:04

【摘要】：目的：探索实验条件下人角质形成细胞及成纤维细胞的体外培养技术，明确培养的角质形成细胞中是否存在表皮干细胞，确定表皮干细胞在皮肤组织中的定位。方法：利用细胞工程方法进行组织分离、原代培养及传代培养等，观察细胞形态；(1)通过免疫组化方法，利用角蛋白单克隆抗体对培养的角质形成细胞进行鉴定，并利用表皮干细胞的相对特异标识分子—CK19对其进行检测分析：(2)利用波形丝蛋白抗体对培养的成纤维细胞进行鉴定；(3)通过免疫组化方法，利用CK19作为特异标识分子，观察人表皮干细胞在不同解剖结构皮肤组织的定位。结果：1、表皮自真皮较完整分离，电镜及免疫组化证实培养细胞为角质形成细胞，免疫组化结果显示：CK反应阳性，部分细胞CK19阳性，表明有表皮干细胞存在。2、利用组织块培养方法，通过倒置显微镜观察及免疫组化染色进行细胞鉴定并证实得到较纯的成纤维细胞。3、免疫组化染色发现CK19阳性细胞位于无毛区皮肤组织的基底层，位于有毛区皮肤组织的毛囊外毛根鞘。结论：体外分离、培养角质形成细胞及成纤维细胞成功，且分离得到的角质形成细胞中有表皮干细胞存在；表皮干细胞在无毛区皮肤组织中位于表皮基底层，在有毛区皮肤组织中位于毛囊外毛根鞘。为人工皮肤的成功构建奠定了基础。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329
【图文】：

表皮,真皮,角质形成细胞,基底层

二、结果l、角质形成细胞的分离及培养取出经disPase酶消化16小时后的包皮组织，石蜡包埋，行4um厚切片，常规脱蜡后，行HE染色，组织形态学观察显示，表皮自真皮分离较完整(见图1，图2)，表皮基底层中细胞基本完整，再联合应用胰蛋白酶旧Dl人消化表皮，可得到较纯净的角质形成细胞，且可收集到绝大部分的基底层及棘层细胞。

表皮,基底层,棘层,颗粒层

【参考文献】