持久稳定混合嵌合体诱导免疫耐受在异种骨髓移植中作用的研究

发布时间：2020-06-17 20:20

【摘要】：目的 为了建立持久稳定混合嵌合体(MC)模型及进一步探讨其对异种骨髓移植(XBMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的防治作用。 方法 1、建立持久稳定MC模型：取7天前开始饮用含红霉素和庆大霉素水4～6周龄SD清洁级大鼠，接受~(60)Coγ射线7.5Gy全身照射(TBI)后，4小时内行XBMT，即经尾静脉输注6～8周龄BALB／c(H-2~d)小鼠骨髓细胞(BMCs)2×10~8／只，2天后，给予腹腔注射环磷酰胺(Cy)50mg·kg~(-1)诱导耐受大鼠后分2组：A1组是XBMT后第14天、21天及28天尾静脉输注无菌生理盐水；B1组是XBMT后第14天、21天及28天尾静脉输注不同剂量BALB／c小鼠脾细胞(SCs)。通过测定小鼠源性细胞和小鼠皮肤移植物在受体大鼠体内植入和存活情况以及混合淋巴细胞反应(MLR)来检测耐受诱导和维持情况。 2、持久稳定MC对XBTM后aGVHD的防治作用：待上述异种模型形成持久稳定MC后，给6～8周龄BALB／c小鼠和C57BL／6小鼠8Gy~(60)Coγ射线致死性TBI后分4组：A2组是给BALB／c小鼠经尾静脉反相输注A1组嵌合大鼠BMCs和SCs；B2组是给BALB／c小鼠经尾静脉反相输注B1组嵌合大鼠BMCs和SCs；C2组是给C57BL／6小鼠经尾静脉输注B1组嵌合大鼠BMCs和SCs；D2组是给BALB／c或C57BL／6小鼠经尾静脉输注生理盐水。观察各组小鼠症状体征、生存时间及病理表现，测定濒死A2组及存活B2组嵌合小鼠体内大鼠源性细胞植入情况，并追踪B2组嵌合率变化情况。 结果 1、测定嵌合大鼠外周血中小鼠源性细胞嵌合情况：通过亚致死TBI+输注BALB／c小鼠BMCs+腹腔注射Cy+供体淋巴细胞输注(DLI)建立持久稳定MC大鼠模型后，在最后输注SCs后60天和120天取大鼠外周血给予荧光单克隆抗体免疫组化后在流式细胞仪(FCM)测定，60天时两 组均测得小鼠源性细胞，Al组为3.98%一10.07%，Bl组为14.31%一 21.94%;120天时Al组降至0.58%一3.34%，Bl组仍维持14.11%一 24.38%。 2、皮肤移植物存活情况:在最后输注SCS后45天行皮肤移植，Bl 组嵌合大鼠对BALB/C小鼠皮肤移植物存活时间较Al组嵌合大鼠对 BALB/c小鼠皮肤移植物存活时间延长，两者有显著性差异(只0.01); Bl组嵌合大鼠对CS了BL/6小鼠皮肤移植物存活时间明显缩短，与131组 嵌合大鼠对BALB/C小鼠皮肤移植物存活时间有显著性差异(只0.01)。 3、MLR结果:在最后输注SCS后90天和120天，检测两组嵌合大 鼠对特异供体及Bl组嵌合大鼠对无关第三者MLR，90天时两组嵌合大 鼠对特异供体反应性均低，差异无显著性(乃0.05);120天时AI组嵌 合大鼠对特异供体反应性升高，而Bl组嵌合大鼠对特异供体反应性仍 低，两者有明显差异(只0.01)。Bl组嵌合大鼠对无关供体始终有明显 反应。 4、aGVHD模型症状体征表现:将上述建立的嵌合大鼠BMCs和SCs 按比例输注给经SGy6OCoY射线致死性TBI的BALB/c小鼠和C57BIJ/6小 鼠，建立aGVHD模型，可见A2组和C2组移植小鼠于15天内出现少食、 少动、精神萎靡、腹泻、弓背体位、脱毛和体重骤然减轻等表现，有的 伴耳廓脚掌红斑、皮肤溃疡;B2组移植小鼠于24天一26天左右出现_L 述症状，迟于AZ组和C2组移植小鼠，且较轻，不伴耳廓脚掌红斑、皮 肤溃疡，存活到60天B2组小鼠己无aGVHD症状体征。 5、嵌合体对aGVHD模型生存期影响:A2组移植小鼠平均生存时间 (MST)为17天;CZ组移植小鼠MST为16天，AZ组和CZ组移植小鼠 均死于aGVHD;B2组移植小鼠生存时间为42一1 50+天，且移植后20天、 40天、60天存活率分别为100%、90%和50%，约半数小鼠死亡，其中死 于aGVHD占死亡者约20%，合并aGVHD和感染占约40%，死于感染占约 40%。BZ组小鼠生存时间比A2组和C2组小鼠生存时间延长，差异有统 计学意义(只0.01);A2组和CZ组小鼠生存时间比较差异无统计学意 义(尸习.05)。 6、aGVHD病理表现:A2组和C2组移植小鼠表现为皮肤中表皮层或 真皮层内可见散在的或条索状分布的淋巴细胞浸润;肝脏胆小管上皮细 胞肿胀、肝实质灶性变性坏死，汇管区淋巴细胞浸润;小肠粘膜不同程 度脱落，固有层或肌层有淋巴细胞浸润。B2组移植小鼠病理表现较轻， 皮肤中表皮层或真皮层内及小肠粘膜固有层仅可见散在分布的淋巴细 胞，肝脏胆小管上皮细胞略肿胀。 7、测定移植小鼠外周血中大鼠源性细胞嵌合情况:取小鼠外周血 经荧光单克隆抗体免疫组化后在FCM测定，濒死A2组小鼠嵌合率约为 97.78%一99.44%，同时测得B2组小鼠嵌合率为82.37%~86.95%;存活 到60人BZ组小鼠嵌合率为45、34%一55.94%，150天时仍维持46.87%一 5;专.6d%。 结沦 l、首次通过非清髓性预处理建立了小鼠一大鼠MC模型，此模型可 弥一补通过大鼠~小鼠模型无法解决的问题。 2、随着时一间延长，经诱导产生的嵌合率会逐渐消失，给rl)Ll能 维持嵌合率，诱导持久特异耐受，说明Dll飞叮成功诱导持久稳定MC来 维持供体特异性异种耐受。 3、持久稳定MC能减轻aGVHD症状体征和病理损害，延长生存时间， 说明持久稳定MC对aGVHD有防治作用，且此防治作用具有特异性。 月、持续稳定MC诱导aGVI们模型中所含供体源性细胞与未形成持久 稳定MC诱导aGVHD模型中所含供体源性细胞相比较低，但到一定阶
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

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本文编号：2718112