日本血吸虫重组亚单位疫苗的研究

发布时间：2020-06-18 06:42

【摘要】： 目的 为寻找有价值的血吸虫疫苗候选抗原分子，本课题从候选基因筛选、克隆和表达及免疫保护性评价方面进行了初步探索。 方法 1 用日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库，并对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增及测序，利用互联网对测序结果进行同源性比较分析，并预测蛋白质结构与功能；2 将SjCAI基因亚克隆至pCEX-5X-3载体，分别将此重组质粒pGEX-SjCAI，以及本室已构建的重组质粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2566，在IPTG诱导下进行表达，分别将表达产物免疫小鼠，并观察免疫保护效果。 结果 1 经三轮筛选，获10个阳性克隆，对其中3个阳性克隆测序的结果显示，1个与Sj原肌球蛋白基因序列显著同源，另两个为新基因片段，命名SjHm1、SjHm2；2 构建了重组质粒pGEX-SjCAI，在大肠杆菌中高效表达了融合蛋白SjGST-CAI、SjGST-31b和SjGST-31c，分别将其免疫小鼠，诱导产生了29.87％、22.71％和13.6％的减虫率，减卵率分别为63.74％、54.21％及45.01％。 结论 1 SjHml、SjHm2编码蛋白有可能作为血吸虫病疫苗候选抗原分子，其免疫保护作用有待进一步研究；2 rSjGST-31b、rSjGST-31c能诱导部分抗日本血吸虫免疫保护力，而rSjGST-31b的免疫效果优于rSjGST-31c；3 SjCAI基因亚克隆至pGEX-5X-3载体后可在大肠杆菌中高效表达，表达产物rSjGST-CAI具有明显的抗生殖免疫力和较好的抗尾蚴攻击感染的保护性免疫，有望成为血吸虫病疫苗新的候选抗原分子。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392
【图文】：

SDS一PAGE显示rsjGST一CAI融合蛋白的分子量为66kDa(图3一3)，这与根据基因序列推算的分子量是一致的。l、

本文编号：2718855