稳定转染MnSOD基因的PC12细胞系的建立及其抗氧化应激作用

发布时间：2020-06-18 18:36

【摘要】： 目的氧应激是指细胞受到活性氧种所致的细胞毒作用。在中枢神经系统中，许多退行性疾病都涉及到氧应激，而MnSOD在抗氧应激中具有重要的作用。为了研究MnSOD在神经细胞中的抗氧应激作用，由于PC12细胞具有一定的神经元的特性，所以本实验研究选用PC12细胞作为研究对象，将MnSOD基因导入细胞中，使之在细胞内稳定表达，然后观察H_2O_2对基因修饰后PC12细胞的细胞毒性作用变化，揭示MnSOD在H_2O_2对PC12细胞的细胞毒中的作用，为以后研究神经系统疾病打下基础，为防治脑氧应激损伤提供依据。方法通过基因转染稳定表达人正义和反义MnSOD 的PC12细胞，用低浓度的H_2O_2攻击各细胞系，采用MTT法、流式细胞仪检测和Hoechest染色方法研究H_2O_2的细胞毒作用。采用 RT-PCR的方法检测转染细胞APP的表达情况。结果发现低浓度的H_2O_2（50μM、100μM）对PC12细胞的细胞毒作用是通过诱导其凋亡，流式细胞仪测试可见在G1峰左侧出现一个亚二倍体细胞群峰型。Hoechst 33258染色见细胞核呈浓染致密的颗粒状荧光，而且有核碎裂的征象。转染正义和反义MnSOD的细胞的MnSOD 酶活性分别比原细胞提高了1倍和降低约70％；转染正义MnSOD 的细胞具有抑制H_2O_2诱发的PC12细胞的调亡作用，而转染反义 MnSOD的细胞使之更敏感。RT-PCR的结果显示MnSOD对APP 的表达无明显影响。结论 MnSOD具有抑制H_2O_2对PC12细胞的凋亡作用，也表明H_2O_2诱导PC12的凋亡作用可能涉及到损伤细胞的线粒体，导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R363

【参考文献】