从HSF1基因敲除小鼠心肌中筛选及克隆热休克反应中受HSF1调控的靶基因

发布时间：2020-06-25 02:57

【摘要】： 用cDNA芯片从热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1，HSF1)基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应中受HSF1调控的靶基因，并对筛选到的未知基因进行分子克隆。方法：①用cDNA芯片检测热休克反应(42℃ 15分钟，恢复3小时)中HSF1~(-/-)小鼠心肌组织基因表达谱的改变(以HSF1~(+/+)小鼠为对照)；②用RT-PCR对cDNA芯片筛选结果进行验证；③对差异表达的已命名基因进行启动子区HSF1结合位点的分析；④利用生物信息学方法对筛选到的未知基因进行分子克隆。结果：①共筛选到差异表达基因1142个；其中在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表达下调的基因为398个，已命名基因为173个；在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表达上调的基因为641个，已命名基因为235个。②在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表达下调2.5倍的已命名基因中，有5个基因启动子区含有热休克元件(heat shock element，HSE)；在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表达上调2.5倍的已命名基因中，有5个基因启动子区含有HSE；③克隆并在GenBank上登录人XLHSRF-1基因(GenBank ID：AY221994)和大鼠XLHSRF-2基因(GenBank ID：AY248698)。结论：在热休克反应中，HSF1~(-/-)小鼠心肌中多个基因表达发生改变；在这些差异表达基因中，有10个基因启动子区含HSE元件，可能受HSF1直接调控；采用生物信息学方法，克隆了两个新的应激相关基因，为进一步研究这些基因的功能及其在应激反应中的作用奠定了基础。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363
【图文】：

散点图,荧光标记,实验组,叠加图

一1对照组/实验组双色荧光标记叠加图

PCR引物,引物,对照组

飨缘陀谄湓诰酇刃菘舜鐚淼丮sFI+/十小鼠心肌中的表达(图3.3一2)。KLF4、Aeasl、HSPaga和GAPDH的引物见表3.3一1。表3.3一1RT一PCR引物序歹l」LengthofGenBankGenenamePrimersequeneePCRIDProducts/bPM32599Glyeeraldehydes一3一phosphateAAGCCCATCACCATCTTCCA/580dehydrogenase(GAPDH)CCTGCTTCACCACCTrCTTGNM_010637MusmuseulusKruppel一likeGCGGGAAGGGAGAAGACAC/297faetor4(gut)(Klf4)，mRNAGGGGAAGACGAGGATGAAGCNM_019811Musmuseulusaeetyl一CoenzymeGGAACTTGTGGTGGCTATGC/299Asynthetasel(AMPforming)GACATCTGGACA’rGGCCTCT(AeaSI)，mRNANM_010481MusmuseulusheatshoekTGGCTGGTGACGTTACAGAC/300protein，74kDa，A(HSpaga)，GGCAGAAACGTGCACAATCCmRNAKLF4AeaslHsPagaM一亡trl丽CtrlHSCtrlHS不了干刁二刁干一/二一不/千刁一+/、一介+/+一/-一斗/十一/二-603bP一卜310bP一卜GAPDH图3.3一2RT一PcR对下调基因的进一步分析”::arkofmolecularmas:(小X174DNA/Haelll)，Ctrl:未经热休克处理对照组，HS:热休克处理组

【参考文献】