人FLT3 Ligand基因的克

发布时间：2020-07-05 16:00

【摘要】： FLT3配体(FL)是1993年由Lyman等以可溶性FLT3受体为底物先后从鼠和人的细胞系克隆获得其基因。由235个氨基酸组成。开始的26个氨基酸组成信号肽，细胞外区156个氨基酸，跨膜区23个氨基酸以及胞浆区20个氨基酸。广泛分布于人体的各种组织，在外周血单个核细胞中表达水平最高，FL是一种具有促进早期造血功能的细胞因子。在再生障碍性贫血、骨髓抑制等一系列造血功能障碍时，血清FL浓度升高，FL是评价造血功能的可靠指标之一。FL单用或与其它细胞因子联合应用，可以有效地扩增造血干/祖细胞，增加定向造血干/祖细胞及除红系以外的各系列血细胞。FL可有效地激发造血干/祖细胞进入细胞周期，因此，对以造血干/祖细胞为靶细胞的基因治疗具有重要意义。研究发现，由于FL对DC细胞、NK细胞及CTL的刺激作用，其在体内具有显著的抗肿瘤作用。此外，FL还有抗病毒、抗细菌感染的辅助治疗，最新研究表明，FL具有显著的辐射防护作用。为了大量制备FL，以及探讨FL的生物学活性，首先，分离人外周血单个核细胞，提取总RNA，采用RT-巢式PCR扩增人FLT3配体胞外段基因，以双脱重回罩区大学习士研丑生论文氧终止法进行DNA序列分析；将测序正确的目的基因克隆入大肠杆菌融合表达载体PRSET－B；重组质粒PRSET－B－FL转化大肠杆菌队（DE3），用IPTG进行诱导后，收集细菌，菌体裂解后，利用常压离子交换色谱的方法对表达蛋白进行纯化，并进行 SDS－PAGE及Western－blot检测． gJ．外周血单核细胞中克隆得到长462hp的巳胞外段基因，测序正确；经 ECORI和 Hjodlll酶切鉴定证实，FL成功地克隆到表达载体 pRSET干；构建的表达载体PRSET－B－FL在大肠杆菌中表达出相对分子量为24kD的融合蛋白，经常压离子交换色谱纯化后的融合蛋白的纯度达3u90x，该融合蛋白具有n 抗原持性．成功地克隆并表达了FL基固，并对融合蛋白进行了初步纯化，为九规模获得FL创造了条件．
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346

【参考文献】