小鼠局灶性脑缺血模型评价方法的改进

发布时间：2020-07-16 17:58

【摘要】： 脑缺血梗死灶的定量分析，目前主要通过经典的苏木精-伊红(HE)染色和氯化三苯四氮唑(TTC)染色等方法。但HE染色须经过组织固定；TTC染色主要检测缺血24小时总梗死区，对缺血后4～6h内和36h后能否确定梗死区还有争议。而且，经HE或TTC染色的脑片就不能进一步作生物化学、组织学和免疫组织化学研究。为寻找评价局灶性脑缺血模型梗死程度更为简便、定量的新方法，本课题探索了透光法评定局灶性脑缺血模型梗死体积的方法，分析透光法测定的脑梗死体积与神经症状评分的相关性，并将透光测得的梗死区域与HE染色所观察的存活神经细胞数进行比较。此外，透光法结合神经症状评分和HE染色还用于评价白三烯受体拮抗剂ONO-1078{pranlukast，4-氧-8-[对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基]-2-(5-四唑基)-4H-1-苯并吡喃半水合物}对小鼠局灶性脑缺血的神经保护作用。方法：成年雄性NIH小鼠60只，随机分成手术组(n=40)和假手术组(n=20)。手术组采用大脑中动脉阻塞法(MCAO)诱导小鼠持续性局灶性脑缺血，假手术组仅暴露颈总动脉作为对照。于手术后24h，进行Bederson's症状评分和爬板、悬挂试验，然后处死取脑，切成1mm厚的冠状脑片，每一脑片先在体视显微镜下进行透光，图像输入计算机；然后，在0.5％氯化三苯四氮唑(TTC)溶液中37℃孵育30min，并将浙江人学硕＿卜学位论文 TTC染色的脑片图像输入计算机。以AnalyPowerl刀软件计算每一脑片以透光法为］ TfC染色法测得的梗死体积，以 PhotOShop 5乃计算缺血组和对照组透光利 TTC染色脑片左右侧灰度。将第5片脑片切成spin冰冻切片，常规HE染色后，光镜下观察并通过摄像头将镜下图像（X 600）输入计算机，对皮层、皮层下的存活神经元进行计数。在另一绢实验中，ONO－1078组（n—15）和对照组（n—14）分别丁人脑中动脉线栓手术前3大利术前h＠腔注射ONO叫 0．ling·kg’或生理盐水，观察 ONO－1078的神经保护作用。结果：在透光试验中，正常脑片组织较为透明，缺血区域明显变暗、灰度增加，TTC 染色脑片正常组织为深红色，缺血区域变白、灰度降低。透光测定的脑梗死体积与＊＊C染色测定的梗死体积具有较好的相关性（r＝0809，P＜0刀01）。缺血组小鼠透光和 TTC染色测得的缺血侧人脑平均灰度、皮层灰度、皮层下灰度和海马灰度，与非缺血侧相应部位及对照组相应部位比较有显著差异（尸＜0001），对照组脑片左右侧及对照组与缺血组非缺血侧比较无显戈差异（P＞OO引。缺血组小鼠神经症状综合评分与对照组比较有显著差异（尸＜0刀01）：透光法测得的梗死体积与练合评分法评定的神经汕状之问只有等级柏关（Fs＝0694，P＜0001）。缺血组HE染色脑片皮层和皮层卜存活神经细胞数与对照组比较明显减少（尸＜0刀01）。透光法测得的ONO－1078组小鼠总梗死体积、皮层梗死体积和皮层卜梗死体积分别为14．8士23．7、6．81土12．0、7．95ill．gmm’，对照组分别为48．5f40．9、23．0i28．8、 25．4土15．3 mm’，提不 ONO－1078能减少脑梗死体积。用 Bederson，s症状评分法和神经症状综合评分法评定的＊NO．1078组小鼠的神经症状均较对照组轻（分别为P＜ 0刀5和P＜0刀1）。＊＊＊－1078明显减低脑半球面积的右／左比值（尸＜0刀5），提示其能减轻脑水肿。ONO－1078组小鼠 HE染色脑片皮层下存活神经细胞数比对照组明显增多（尸＜0刀5）。 2 浙江大学硕士学位论文结论： l 透光测定的小鼠脑梗死体积与TTC染色测定的梗死体积具有较好的相关性。 2 透光法测得的梗死体积与综合评分法评定的神经症状评分之间具有等级相关。 3 缺血小鼠HE染色脑片缺血侧皮层和皮层下存活神经细胞数明显减少，与透光法观察的神经损伤相一致。 4 透光法可川于局灶性脑缺血的定量分折，也可用来确定神经保护药 ONO－1078的神经保护效应。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R-332

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