酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1相关蛋白的研究

发布时间：2020-07-30 00:12

【摘要】： 目的：利用酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1(preS1)蛋白相关蛋白，以利于探讨前S1蛋白在乙型肝炎病毒的入胞机制。 方法：以HBVDNA阳性血清为模板通过PCR法扩增含EcoRI与PstI酶切位点的pres1基因序列，pAS2-1载体及pres1基因PCR产物经双酶切并连接，转化到大肠杆菌JM105，对重组质粒pAS2-1-pres1进行序列测定。乙酸锂转化法将重组质粒转化入酵母菌AH109，以Western Blot法证实重组质粒在酵母细胞中的表达。将pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞，通过选择性培养、LacZ活性测定筛选阳性菌落，分离实验及交合实验排除假阳性，PCR扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定，结果提交NCBI的BLAST应用程序，在GeneBank数据库查询其同源序列。 结果：重组质粒pAS2-1-pres1经序列测定含有完整的pres1基因片段，Western Blot证实转化的酵母细胞能正确表达完整的pres1-BD融合蛋白，pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后，在5×10~6转化子中，经选择性培养共长出97个菌落，17个为LacZ阳性菌落，分离实验及交合试验筛选出1个阳性菌落，PCR扩增产物经GenBank数据库查询与人类初期多肽相关复合体a亚单位(Homo sapiensnascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide NACA)同源。 结论：成功构建了 pASZ刁个 真核表达载体，并通过酵母双杂合 体系筛选体内与 presl相互作用的蛋白 NACA。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346

【参考文献】

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1 沈岩,吴冠芸,陈雨亭;酵母双杂交体系(Yeast Two-Hybrid System):一种研究蛋白一蛋白相互作用的强有力方法[J];国外医学.遗传学分册;1997年01期

2 文立民;发现蛋白质相互作用的新途径──酵母双杂交系统[J];国外医学.遗传学分册;1997年02期

3 冯福民,华北煤炭医学院预防医学系;前S1蛋白在乙型肝炎诊断、治疗及预防中的作用[J];临床肝胆病杂志;1998年02期

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本文编号：2774701