缝隙连接在乙酰胆碱致血管平滑肌细胞内皮源性超极化中的作用

发布时间：2020-08-02 04:15

【摘要】： 自1980年Furchgott发现乙酰胆碱(Acetylcholine,ACh)可通过内皮释放一种舒张因子(EDRF)，使预先收缩的免主动脉环松弛以来，人们对内皮源性血管张力调节机制进行了广泛的研究，现已证实，EDRF便是一氧化氮(NO)。除EDRF外，80年代末Weston和Suzuki等发现ACh等血管活性物质还可使血管内皮释放一种可使SMC膜电位超极化的因子(EDHF)。EDHF介导的血管舒张不受血红蛋白和亚甲蓝的影响，说明其作用机制与NO无关。EDHF的性质尚未确定，有的研究认为其与EC的K~+通道有关，而有的研究认为平滑肌的内皮源性超极化与EC和SMC之间的缝隙连接(gap junction)有关，因为两者通过缝隙连接有着电偶联作用。本文利用细胞共培养和膜片钳技术，探讨缝隙连接在血管张力调节中的作用。 1．EC和SMC共培养模型建立采用微孔多聚碳酸酯滤膜(polycarbonste filter membranc)作为载体，将牛主动脉EC和家兔主动脉SMC接种于孔膜的两侧，建立EC和SMC联合培养模型，模拟血管壁EC和SMC间的结构关系。结果：共培养的EC呈单层生长，而SMC呈多层生长，同类和异类细胞间都有缝隙连接形成，缝隙连接的形成与培养的时间有关，在SMC接种后24h，EC通过微孔与SMC形成缝隙连接。此种EC和SMC共培养模型模拟了在体时EC和SMC之间的结构关系，可以用来研究两种细胞间的相互影响。第回军巴大学项士学位论又 2、ACh对培养的牛主动脉EC电生理学影响利用常规全细胞记录方式（whole－cell patCh Clamp），测得EC静息电位呈现两个峰值，分别在刁2 f 7InV（n—42）和I2士 5（n—6）处，膜电流主要为一内向整流性 K”电流。10 k M ACh可致牛主动脉 EC膜电位产生超极化；可引起牛主动脉EC产生一个外向电流。ACh这一作用可被钙激活钾通道（Kc＊阻断剂 TEA mM抑制。结果提示：在静息状态下，牛主动脉＊C膜上的主要通道是内向整流性义通道：＊＊h 致EC超极化，该超极化作用可能与K。；；的厂放有关。 3、ACh对家兔主动脉SMC电生理学影响采用全细胞膜片钳技术观察家兔主动脉SMC上的钾通道活动情况；并探讨了 ACh对 SMC膜电位和钾电流的作用。结果：用全细胞膜片钳记录的电流钳制方式测得家兔主动脉SMC的静息膜电位为－45 土smV（n—27）。观察到SMC上主要存在的钾通道电流为Kc。，对TEA 门）敏感，对 4AP门）不敏感。l和 10卜M ACh对该通道电流和膜电位均无作用。 4、ACh对与EC共培养的SMC电生理功能的影响 mvMAC卜可致家兔主动脉SMC膜电位产生一超极化作用，该超极化作用不受NO合成酶阻断剂硝基精氨酸队－NNA，100卜M）的影响，但这一作用可被 lmM TEA或维隙连接阻断剂 40 u MIS p－甘草次酸门sc－g灯C厂rhchnjC。［ChI，IHo－（A）抑制。表明：＊＊h对S＊C 产生内皮源性超极化作用可能与SMC上KC。厂放有关，且该内皮源性超极化作用与EC与SMC之间的缝隙连接有密切的关系。－3 第口二匠大学阿士拿位论文结论：建立的以微孔聚碳酸酯膜为载体的EC与SMC共培养模型，该模型可以模拟在体时血管内皮和平滑肌细胞间的组织结构关系。 ACh可以导致牛主动脉EC膜电位超极化，以及引出一外向电流，此变化均与KC。有关。而ACh对培养的家兔主动脉SMC的膜电位和钾通道都没有作用：当EC与SMC共培养时，ACh可致家兔主动脉SMC 膜电位产生内皮依赖性超极化，ik作用与内皮释放的N O无关，可被钙激活 K”通道（KQ）阻断剂 TEA和缝隙连接阻断剂部分阻断。实验结果提示ACh对与EC共培养的SMC影响可能与EC膜上的KC。激活有关，之后＊C通过＊C与S＊C问的缝隙连接直接将电信号传递给 SMC，引起SMC膜上的Kc。厂放，仗SMC超极化，继而引起血管的舒张反应。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R33

【共引文献】