层粘连蛋白-5γ2链Ⅳ功能区基因克隆及蛋白表达

发布时间：2020-08-14 06:34

【图文】：

1条为3 015 bp的PGEM-Teasy克隆载体,另1条为600~700 bp之间的γ2链Ⅳ功能区基因;与空克隆载体对照重组质粒PCR反应得到1条600 bp左右条带(图1)。测序结果证实,得到的是含长647 bp LN-5γ2链IV功能区基因克隆载体。1:克隆载体PCR产物; 2:空PGEM-TeasyPCR; 3:DNA标准带DL1500;4:重组质粒EcoRI/BamHI双酶切; 5:λHindIIIDNA标准带/DNA标准带DL1500图1　克隆载体双酶切鉴定、PCR产物琼脂糖凝胶电泳图3.重组表达载体及表达蛋白鉴定:通过重组pBV220及PBV220EcoRI/BamHI双酶切鉴定,重组pBV220被切为2条DNA条带,3660 bp 1条带为pBV220载体,600~700 bp间的条带为γ2链IV功能区基因;而空pBV220仅1条DNA带(图2),证实构建出重组表达载体。含PBV220表达载体转化大肠杆菌DH5α诱导后,经聚丙烯凝胶电泳和凝胶成像系统分析(图3),发现1条分子量26 000

表达载体转化大肠杆菌DH5α诱导后,经聚丙烯凝胶电泳和凝胶成像系统分析(图3),发现1条分子量26 000,占菌体总蛋白60%的表达蛋白(图4),且与含γ2链Ⅳ功能区蛋白分子量一致。三、讨论在本试验中,当原代细胞培养至细胞融合时,提取RNA质量较高。这可能与分离消化表皮时,酶对细胞的损伤或分离时间过长,RNA被降解有关。研究选用pBV220载体可用于多种外源基因的表达,其表达量占菌体总蛋白60%~80%。另外,外源基因ATG与SD序列之间的合适距离一般为4~10个核苷酸即可

【共引文献】

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