蛋白质的液相色谱复性

发布时间：2020-08-27 07:05

【摘要】： 本文研究了变性蛋白质在不同种类液相色谱上的复性情况。分别用高效疏水色谱(HPHIC)和高效离子交换色谱(HPIEC)对盐酸胍、尿素、SDS变性的11种蛋白质进行了复性和保留行为的研究。11种蛋白质中有5种可以在HPHIC上得到复性。结果显示：其中分子量小、结构简单的蛋白质复性效果好，分子量大、含有辅基、结构复杂的复性效果差。复性效果好的蛋白质不仅复性效率高，而且保留时间、峰型及Z值均与天然蛋白相似。盐酸胍变性的蛋白质复性后的质量回收率和活性回收率均高于尿素，SDS变性的蛋白质构象难以恢复，复性效果最差。在HPIEC上，复性的蛋白质也表现出相似的结果。但是只有3种蛋白获得复性，而且质量和活性回收率普遍低于HPHIC，Z值、保留时间虽然与天然蛋白相近，但峰型相对较差，复性条件的选择也较HPHIC困难。蛋白质在疏水作用色谱上的复性效果优于离子交换色谱。 其次，我们又用二硫苏糖醇(DTT)将胍变及脲变核糖核酸酶(RNase)的二硫键打断，加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)，然后用HPHIC、HPIEC和排阻色谱(SEC)对其进行复性。对二硫键断裂的RNase在三种色谱上的复性效果进行比较的同时，还研究了色谱固定相、变性剂、氧化-还原剂对复性的 第四军医大学硕士学位论文 影响。研究发现：三种色谱固定相均对RNase的复性有所贡献。RNase在 HPHI、HPIEC上的质量和活性回收率高于SEC。用三种色谱法对RNase进 行复性时，在流动相中加人低浓度的变性剂门刀mow GuHCI或ZomollL Uea），可以提高RNase的复性效率。也可以通过选择合适的氧化剂、还原剂 的比例提高复性效率，如狐变RNase在Dry与GSSG的浓度比为1：2＊， 腺变RNase为1：2七时，RNase的质量和活性回收率较高。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R341

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 年四季;张金平;高燕;杨燕;向丽;袁青;;重组IL-33融合表达载体的构建、蛋白表达及纯化[J];泸州医学院学报;2011年05期

2 郭芳芳;邹立林;吴英松;胡志明;李金龙;吕建新;高基民;;用于时间分辨荧光免疫分析的结核分枝杆菌培养滤液蛋白10参照品的制备[J];南方医科大学学报;2011年06期

3 姚蔚;谢旦立;郭雅君;楼永良;;创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Jurkat-T淋巴细胞凋亡的研究[J];温州医学院学报;2011年04期

4 张霞;巨红妹;王云华;李雅杰;;蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2(Sir2)基因的克隆、表达与纯化[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2011年03期

5 林晓思;许健;王生育;颜江华;;抗CD5单链抗体的基因构建、蛋白纯化及活性鉴定[J];中国生化药物杂志;2011年04期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相关会议论文 前10条

1 任国平;蔺宗;王志珍;;大分子拥挤对3-磷酸甘油醛脱氢酶变性和复性的影响[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

2 崔志芳;关怡新;姚善泾;;温敏性凝胶的制备及其在溶菌酶复性中的应用[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年

3 王骊丽;贾佳;王菲;耿信笃;;新型二维液相色谱柱对重组人FL包涵体的复性与同时纯化[A];全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年

4 宁云山;王小宁;周宏伟;张肜;周海梦;;一种高效的重组蛋白质复性方法及其机制研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年

5 李华昌;符斌;周春山;;贵金属高效离子交换色谱分离理论及应用研究[A];第七届北京青年科技论文评选获奖论文集[C];2003年

6 宁云山;王小宁;周宏伟;张肜;周海梦;;一种高效的重组蛋白质复性方法及其机制研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

7 冯培刚;张莉莉;王恬;;枯草杆菌1398中性蛋白酶一些性质的研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年

8 于瑞嵩;黄建珍;李震;;尿素浓度梯度复性重组牛白细胞介素-2的研究[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年

9 阮翔;李冬海;许强;公衍道;匡廷云;张秀芳;赵南明;;磷脂酰胆碱对光系统Ⅱ的复性作用[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

10 刘亚宁;刘成刚;赵新华;朱美财;陈涛;;利用生物发光测定PBP对荧光素酶复性的促进作用[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

相关重要报纸文章 前10条

1 本报记者 沈义　通讯员 蒲昌迅;升迁无望竟上演“报复性腐败”[N];检察日报;2011年

2 向贤彪;“报复性腐败”终害己[N];中国纪检监察报;2011年

3 妙首;后市将有报复性反弹出现[N];华夏时报;2003年

4 王兆先;强麦即将出现报复性反弹[N];期货日报;2004年

5 银河证券 夏桂林;大盘近期有望出现报复性反弹[N];华夏时报;2003年

6 李攀峰;连粕 报复性上涨[N];期货日报;2005年

7 霜沐;对“报复性腐败”不能掉以轻心[N];检察日报;2010年

8 小娣;近期行情并非“报复性反弹”[N];中国商报;2003年

9 林雨;豆、粕报复性反弹[N];期货日报;2004年

10 浩瀚;“报复性腐败”,别只当狡辩[N];法制日报;2011年

相关博士学位论文 前10条

1 李华昌;贵金属高效离子交换色谱分离理论及应用研究[D];中南大学;2002年

2 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年

3 高永贵;溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究[D];浙江大学;2002年

4 崔志芳;温敏型聚N-异丙基丙烯酰胺凝胶协助蛋白质体外复性的基础研究[D];浙江大学;2004年

5 王彦;液-固界面的吸附及溶菌酶在液相色谱中复性的应用研究[D];西北大学;2002年

6 樊建勇;人源性抗角蛋白抗体的高效表达及其作用研究[D];第四军医大学;2004年

7 申烨华;重组人γ-干扰素生产工艺优化及α-糜蛋白酶复性研究[D];西北大学;2001年

8 董晓燕;辅助因子促进蛋白质复性的研究[D];天津大学;2005年

9 李英辉;靶向核糖核酸酶抗乙肝病毒作用的研究和抗乙肝病毒机制的初步探索[D];第四军医大学;2005年

10 胡志明;血管内皮细胞生长因子的制备及其治疗股骨头坏死的实验研究[D];第一军医大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 黄亚渝;蛋白质的液相色谱复性[D];第四军医大学;2002年

2 侯丽萍;《老子》“大美”思想及王弼的阐释—兼及对魏晋南北朝文艺思想影响[D];首都师范大学;2004年

3 吴丹;试论李翱《复性书》的心性思想[D];苏州大学;2004年

4 史广泉;添加剂与流加操作辅助变性溶菌酶复性动力学[D];天津大学;2004年

5 司马健;（一）hsTRAIL基因的克隆表达、载体选择及蛋白复性研究 （二）谷胱甘肽S-转移酶（GSTp）半胱氨酸的定点突变及其在293细胞中的功能研究[D];南京师范大学;2004年

6 张培源;单链抗体ScFv2F3的表达纯化及复性研究[D];吉林大学;2006年

7 程晓玲;人工分子伴侣体系辅助溶菌酶复性的研究[D];浙江大学;2005年

8 邵玲莉;重组大肠杆菌发酵产血管抑素的研究[D];江南大学;2004年

9 曾艳霞;人胎盘碱性磷酸酶变性与复性的研究[D];青岛大学;2004年

10 罗惠霞;新型rPA(K)原核载体的构建及其表达研究[D];宁夏大学;2005年

本文编号：2805787