模拟小鼠IL-18天然生成的真核表达载体体系的构建及其生物学活性的初步研究

发布时间：2020-09-03 16:33

　　 目的：构建模拟小鼠IL-18天然生成的真核表达载体体系。 方法：用RT-PCR方法从小鼠脾细胞的总RNA中扩增出编码小鼠IL-18前体(mpro-IL-18)的基因，克隆至T载体pCR4-TOPO后，再定向克隆至真核表达载体pVR1012，构建成小鼠IL-18前体真核表达载体质粒pVR1012-mpro-IL-18；将小鼠IL-1β转换酶mICE的基因从克隆载体亚克隆至真核表达载体pEGFP-N1，构建成小鼠IL-1β转换酶真核表达载体质粒pEGFP-N1-mICE。将pVR1012-mpro-IL-18和pEGFP-N1-mICE单独或共同转染COS-7细胞，用RT-PCR法检测两载体的mRNA表达；用免疫印迹法检测转染细胞中IL-18蛋白的表达；用ELISA法检测转染细胞培养上清中IL-18的分泌；用~3H-TdR掺入法检测转染细胞培养上清中IL-18与IL-2共同作用的小鼠脾细胞增殖。将pVR1012-mpro-IL-18、pEGFP-N1-mICE和pVR1012-hIL-2三种真核表达载体质粒联合肌肉注射健康小鼠，用JAM-TAST法检测该小鼠脾细胞CTL杀伤同基因型肿瘤细胞的能力。 结果：正确构建了小鼠IL-18前体及小鼠IL-1β转换酶两种真核表达载体质粒，分别转染COS-7细胞后能检测到相应mRNA的表达。在pVR1012-mpro-IL-18单 中文摘要 独gb pVR1012－mpro－IL刁 和 pEGFP－NlmlCE共转染的 COSj细胞中能检测到前体和成熟两种不同形式的 ILIS 蛋白表达，并且 IL刁 8能分泌到上清中；所分泌的 IL刁 与IL上联合作用可增强小鼠脾细胞增殖能力。pVR1012－ mpro－IL－18、pEGFP－NlmICE禾 pVR1012－hIL－2三种真 核表达载体质粒联合肌肉注射健康小鼠，显著提高了其 脾细胞 C TL杀伤同基因型肿 瘤细胞 白 自力。 结论：构建了模拟小鼠 IL刁 8天然主成的真核表达 载体体系，该体系与 几二真核表达载体质粒共转染有可 能用于肿瘤的基囚治疗。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马波;邢明伟;刘晓玫;乌伊罕;韩先杰;王君伟;;携带AIVHA基因鸭肠炎病毒转移载体的构建[J];黑龙江畜牧兽医;2011年11期

2 ;[J];;年期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相关会议论文 前10条

1 刘忠泉;邢爱英;贾红彦;李自慧;郑晓静;曹庭明;杜风娇;杜博平;古淑香;张宗德;;结核分枝杆菌复苏因子E的真核表达及鉴定[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

2 潘敏慧;许nr;刘佳;余泉友;成传刚;田甜;吕军;鲁成;;两个家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆和真核表达[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集（1）[C];2009年

3 张元鹏;王磊;常维山;张振杰;赵协;;猪趋化因子CXCL12的克隆与真核表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

4 刘书逊;安华章;于益艺;李楠;陈涛涌;林乃松;王闻雅;曹雪涛;;3种新型泛素样分子的克隆、真核表达、结构分析和功能研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

5 沈敏;王新华;刘守仁;钟发刚;杨华;连宏军;陈晓军;甘尚权;;新疆绵羊生长激素基因的克隆及真核表达[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年

6 马玉萍;王向鹏;赵钦;王承宝;周恩民;;PRRSV细胞受体CD163的真核表达及鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

7 李蕾;王润田;王兆源;杨永杰;葛锡锐;王蕙芬;;模拟mIL—18天然生成的真核表达体系的构建3—A—W5—78—P及其生物学活性的初步研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

8 董忠军;赵跃然;游力;魏海明;田志刚;;小鼠趋化因子SLC的基因克隆及真核表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

9 钱年超;贾立军;薛书江;张影;张守发;;牛瑟氏泰勒虫MPSP双表位基因的克隆及真核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

10 赵协;张廷虹;常维山;;猪Mx1基因的克隆及在293T细胞中的表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

相关重要报纸文章 前10条

1 何珊;搏击市场数风流[N];中国企业报;2003年

2 魏开敏;单纯收缩期高血压咋治疗[N];中国中医药报;2004年

3 世基投资;国药科技(600421)：技术领先 医改受益[N];中国证券报;2007年

4 本报记者 张松伟;高血压患者应成为“半个医生”[N];中国消费者报;2005年

5 赵成会;不宜与降压药合用的药物[N];中国中医药报;2005年

6 本报记者 黄静;别让痛风透支你的生命[N];人民政协报;2002年

7 汪承柏;中西医结合诊治慢性重型肝炎[N];中国中医药报;2003年

8 张中桥;四军医大西京医院成功建立胃癌GC9811P-GFP细胞株[N];中国医药报;2006年

9 王钟林;崭露头角的沙坦类降压药[N];大众卫生报;2004年

10 本报记者 孙晨;医药高新成果专场推介会精彩纷呈[N];中国高新技术产业导报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 甘强;rhBMP9的真核表达，纯化及体外生物骨诱导活性分析[D];重庆医科大学;2012年

2 戴毅;血栓调节蛋白基因防治动脉损伤后血栓形成和血管狭窄的实验研究[D];重庆医科大学;2004年

3 尹俐;含硒谷胱甘肽硫转移酶的真核表达及抗氧化作用研究[D];吉林大学;2012年

4 胡敬东;鸡白细胞介素18成熟蛋白基因克隆与表达的研究[D];山东农业大学;2004年

5 吴寿岭;血管紧张素转换酶基因多态性、血管紧张素Ⅱ受体-1基因多态性与原发性高血压关系的研究[D];河北医科大学;2003年

6 马越云;抗LPS Fab、BPI和Fab-BPI融合蛋白真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达[D];第四军医大学;2001年

7 丘玉昌;重组人肝细胞生长因子的真核表达及对小鼠实验性肝纤维化的治疗作用[D];第一军医大学;2001年

8 刘娟;重组人中性粒细胞多肽_（1，3）的制备及其体外抗HIV-1，HSV-1作用的初步研究[D];第四军医大学;2005年

9 阮承迈;抗HBsAg抗体在CHO细胞中表达量提高研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2002年

10 黄庆生;组织型纤溶酶原激活物DNA改组的探索研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2001年

相关硕士学位论文 前10条

1 李蕾;模拟小鼠IL-18天然生成的真核表达载体体系的构建及其生物学活性的初步研究[D];河北医科大学;2002年

2 李燕舞;D28k钙结合蛋白基因真核表达质粒的构建及其表达效果的研究[D];扬州大学;2004年

3 吴发兴;伪狂犬病病毒gE糖蛋白基因的克隆、测序及真核表达质粒的构建[D];西北农林科技大学;2002年

4 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年

5 胡艳秋;人脑源性神经营养因子（hBDNF）的克隆与表达[D];华中农业大学;2004年

6 边席峰;猪圆环病毒2型ORF2基因的真核表达及间接ELISA方法的建立[D];四川农业大学;2005年

7 栾杨;犬新孢子虫吉林株SAG1基因的真核表达及免疫学评价[D];延边大学;2010年

8 陈振海;猪瘟病毒E0基因在原核与真核表达系中的表达[D];中国农业大学;2003年

9 李树伟;猪肌生成抑制素成熟蛋白编码序列的克隆与真核表达[D];中国人民解放军军需大学;2002年

10 杨卫冲;牛γ干扰素基因cDNA的克隆、表达及其表达产物单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2005年

本文编号：2811686