荧光微球技术在结核杆菌耐利福平菌株rpoB基因突变多重检测中的应用研究

发布时间：2020-09-15 14:42

　　 结核杆菌耐药性菌株的出现与蔓延是导致结核病日趋严重的重要原因之一，其中以结核杆菌耐利福平菌株的影响尤为突出。据报道，大于96％的结核杆菌耐利福平临床分离株的rpoB基因都发生了突变。在过去的十几年中，先后出现了很多用于耐利福平结核杆菌rpoB基因突变的检测方法，但大多在不同程度都存在局限性。 本研究中，荧光微球技术被引入结核杆菌耐利福平分离株的检测，目的在于建立一种耐利福平rpoB基因突变的多重检测方法，具体的研究工作分为三个方面： 1．结核杆菌rpoB基因高频突变区的PCR扩增； 2．针对结核杆菌rpoB基因531位和526位两个突变频率较高的位点设计出5条特异性探针，用荧光微球技术对结核杆菌耐利福平菌株rpoB基因的突变进行多重检测； 3．荧光微球技术与利福平药敏实验、DNA测序法及PCR-SSCP法的对照分析。 研究结果表明，用分别偶联了五条特异性探针的五组荧光微球对42株结核杆菌临床分离株进行检测，发现有十株结核杆菌的rpoB基因分别在531位和526位发生单碱基突变。这一结果分别与利福平药敏实验和DNA测序得到的结果相一致。PCR-SSCP法对照实验结果显示，有些结核杆菌耐利福平突变菌株未能检出，由此进一步说明荧光微球技术具有更高的检测灵敏度和准确性。此外，通过测序检测到两株耐利福平结核杆菌的rpoB基因分别在同一氨基酸密码子中发生了双碱基突变；还发现在两株利福平敏感菌株的rpoB基因中也存在两处以上的突变位点，并分别位于不同的氨基酸密码子中，这可能是第二位点突变对菌株耐利福平突变产生抑制的结果。
【学位单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R346

【共引文献】

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本文编号：2819098