雪旺细胞体外培养及相关性状的实验研究

发布时间：2020-09-17 12:51

　　 目的：探讨从新生大鼠周围神经分离、培养、纯化获得大量雪旺细胞的有效手段，观察体外培养雪旺细胞的增殖特征及其对碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factor ,bFGF)刺激的反应。 方法：取新生（出生2～5天）SD大鼠的双侧坐骨神经，仔细去除神经外膜后，双酶法短时间消化，运用反复植块法，同时加用抗有丝分裂药物Geneticin抑制成纤维细胞的生长，获得纯化的雪旺细胞，S-100蛋白免疫组化法鉴定，观察其生长并绘制生长曲线，按照细胞倍增时间公式计算其倍增时间，运用MTT法和流式细胞仪测定雪旺细胞对不同浓度的bFGF的反应。 结果：运用上述培养方法能够明显抑制成纤维细胞的生长，获得大量雪旺细胞，经S-100蛋白免疫组化鉴定，雪旺细胞纯度达95％以上，消化传代后，雪旺细胞纯度达98％以上，细胞数量达1×106/ml以上；绘制其生长曲线，并计算得出体外培养的第二代雪旺细胞体外倍增时间为8天；以不含bFGF组为对照组，bFGF浓度分别为1ng/ml和10ng/ml的两组可明显增加雪旺细胞密度，与对照组之间差别有统计学意义（P0.001），流式细胞仪检测：经浓度为10ng/ml的bFGF处理后，处于S期(Synthesis phase)和G2M期(Gap2 phase and Mitosis phase)的雪旺细胞明显多于不含bFGF的对照组，两者之间差别有统计学意义（P0.01）。 结论：本培养方法能够获得大量高纯度的雪旺细胞，适宜浓度的bFGF对雪旺细胞有较强的促增殖作用，为组织工程修复神经缺损的实验研究提供了可靠的细胞来源。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R329.2

【参考文献】

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本文编号：2820736