C50株杂交瘤细胞体外培养的初步研究

发布时间：2020-10-10 11:36

　　 癌胚抗原(CEA)是存在于血液中和某些肿瘤细胞表面的一种高分子量糖蛋白(200KD)。在胎儿和患有CEA分泌性癌症的患者体内,CEA的水平明显高于正常人,因而可作为特异的肿瘤标记物,进行相关肿瘤的的诊断和治疗。北京生研所研制的C50株CEA单克隆抗体经过临床实验证明具有亲和力高,并具有与人白细胞、人骨髓无反应的特点,在CEA相关肿瘤的癌灶免疫显像和治疗的领域有广阔的应用前景。本文从抗体生成特性及培养策略的角度对C50株杂交瘤细胞的体外培养进行了初步研究,从而为进一步C50细胞的体外大规模培养打下了基础。 本文首先建立了一种特异检测上清C50抗体浓度的ELISA方法。另外通过蛋白G亲和层析,我们将含血清培养基中的牛血清IgG完全去除。当这种培养基(-GFCS培养基)被用于C50细胞体外培养时,仅再需一步蛋白G亲合层析即可将C50抗体从培养上清纯化出来,最大限度的限制了牛IgG的污染。 通过对C50株杂交瘤细胞的染色体进行计数,我们发现少数C50细胞(16%)的染色体数目低于80,不在正常范围(80-112)内。另外,有限稀释法亚克隆C50株杂交瘤细胞的结果显示,C50细胞的阳性率比较低(84%)。因此,C50细胞的遗传不稳定性可能从根本上影响了其体外培养时的抗体生成。 通过对体外培养的C50株杂交瘤细胞的抗体生成动力学进行研究,我们发现上清C50抗体浓度比较低,不超过20μg/ml,并且不稳定。在一个生长周期内,上清C50抗体浓度与细胞的活力指数、活细胞密度正相关,而细胞的比生长速率基本保持不变。提高细胞的接种密度能够提高最大活细胞密度和上清C50抗体浓度,使抗体分泌高峰提前。能够维持C50细胞正常生长和抗体生成的最低血清浓度为5%。在此基础上,提高血清浓度能够使抗体分泌高峰提前。半连续动态培养C50细胞的
【学位单位】：北京生物制品研究所
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2000
【中图分类】：R392
【部分图文】：

细胞染色体照片

图9.复壮前后的C50细胞的形态比较(A)未经复壮的C50细胞;B()取自肠系膜肿瘤组织块的C50细胞;(C)取自腹水的C50细胞图9.所示:经过体内复壮的C50细胞明显聚集牛长，这提示C50细咆可能具群体依赖性，即C50细胞的生长及抗体分泌依赖于共自身分泌的某些细胞因子。

Lane4一6:5倍浓缩的20哈GFCSD既E，依次每泳道上样30林1、20林1、10“l:Lane7:牛I肠:蛋白G亲和层析解离峰(图12)不经浓缩，上样20协l如图13.所示:经蛋白G亲和层析后，一GFCS培养基中的牛血清工幼已被去除。3.用不同血清浓度的培养基培养C50细胞时，细胞的生长和抗体分泌为了确定血清对C50细胞的生长及抗体分泌的影响，本实验采用渐进的方式降低细胞培养液中的血清浓度，在35一7Oc褚的T一Flask中静态培养C50细胞，比较四个血清浓度梯度的培养液中C50细胞的生长和抗体分泌。上清中C50抗体的浓度采用CSO一日下SA进行检测。八U︸UCUnUC︸0︵nU甘p口0La六UL乃qd八乙n‘，二1三︵六砌\胶︶知侧韶界鹅入入只只///彭篡么、、一l一一_一一、曰‘---司汤一习n︸n甘0o0n﹄八甘OLI曰八目尸口﹄U二八口J今曰，︸，，1‘、1八淤众\卜(︶侧知韶黑122436魂86(
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 徐治波,陈锋,高蜀生;CEA和CA19-9在鉴别良、恶性胸水中的诊断价值[J];四川医学;2003年12期

2 宗晓福,刘云霞,王广贤;细胞角质蛋白19片段与癌胚抗原联合检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值探讨[J];中国防痨杂志;1999年02期

3 张澎,和世彦,戴荣增,邵莹,郝希山;HLA分型在胃肠肿瘤患者中的分布[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年03期

4 王剑锋,徐惠绵,吴涛;RT-PCR检测胃癌腹腔液中癌细胞CEA mRNA的表达预测腹膜微转移的研究[J];中国肿瘤临床;2000年07期

5 江素华,李宇清,关广雄,曾波航,黄慧;80例肺癌患者的免疫球蛋白、补体水平及其与CEA的关系[J];中国癌症杂志;2000年04期

6 徐秀云;CEA与CA~(50)联合检测鉴别消化系统良恶性疾病[J];第四军医大学学报;2002年14期

7 杨柏成,郭振泉,黄仪秀,张凤英,朱圣庚;腺病毒介导MTS1的抑癌作用[J];北京大学学报(自然科学版);2003年06期

8 薛宝华;癌胚抗原粘附作用及其与肿瘤发生发展关系的研究[J];中国冶金工业医学杂志;1992年04期

9 吕大鹏,董新舒,温岐山,张希林,赵家宏,丁立,张锁英,李长生,秦世杰,陈静;大肠癌肝转移患者胆汁中癌胚抗原含量测定的临床价值[J];中国肿瘤临床;1994年05期

10 王建伟!基础医学院病理教研室长春130021,李一雷!基础医学院病理教研室长春130021,王群!基础医学院病理教研室长春130021,姜云鹏!基础医学院病理教研室长春130021,陈远耀!基础医学院病理教研室长春130021第一临床学院消化内科,郭树彬!第一临床学院消化内科,宋国培!第一临床学院;联合检测胃液中腺癌相关抗原TAG- 72及癌胚抗原对胃癌诊断价值的研究[J];白求恩医科大学学报;1999年06期

相关博士学位论文 前10条

1 何群;胃癌患者CEA和CK20检测的意义及免疫传感器应用初探[D];中南大学;2010年

2 龚学军;CEA及CK20的不同检测方法对结直肠癌诊断及预后评估的初步探讨[D];中南大学;2010年

3 王贤辉;抗凋亡与增殖抑制策略在杂交瘤细胞规模化培养中应用的研究[D];第四军医大学;2004年

4 钟来平;口腔鳞癌患者唾液中肿瘤标志物的表达及其机制研究[D];浙江大学;2006年

5 贡向辉;哺乳动物细胞培养工艺优化[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2006年

6 赵东兵;大肠癌组织中端粒酶活性和直肠癌预后相关生物学标志的研究[D];中国协和医科大学;1998年

7 王臣;囊素样肽在哺乳动物中免疫调节机制研究[D];南京农业大学;2008年

8 缪德年;囊素对杂交瘤细胞增殖和抗体分泌的影响及其信号通路[D];南京农业大学;2003年

9 琚济杭;食管癌单克隆抗体SGB-8的研制及NFAT5对杂交瘤细胞抗体生成的影响[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2007年

10 司丽娟;胆管癌术前定性诊断方法的研究[D];吉林大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 王祥斌;C50株杂交瘤细胞体外培养的初步研究[D];北京生物制品研究所;2000年

2 尹家祥;分泌抗鼠疫杆菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立[D];昆明医学院;2004年

3 王玉平;玉米赤霉烯酮ELISA定量检测试剂盒研制高效液相色谱法的建立及标准比对研究[D];河北医科大学;2005年

4 郑佳;T-2毒素抗独特型多抗的制备及无毒ELISA定量检测试剂盒的初步研制[D];郑州大学;2006年

5 闫珺;培元抑瘤汤对老年晚期非小细胞肺癌CEA及生存质量的影响[D];黑龙江中医药大学;2011年

6 叶玲玲;一种高通量定量检测细胞凋亡方法的建立和初步应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

7 马蕾;新疆地区汉族、维吾尔族晚期非小细胞肺癌患者血清中CA125、CEA表达的差异性研究[D];新疆医科大学;2009年

8 廖存;血清CEA阴性结直肠癌患者蛋白组学比较研究[D];广西医科大学;2011年

9 覃建雄;扶脾益肠汤对结肠癌术后患者血清CEA水平及生存质量的影响[D];黑龙江中医药大学;2012年

10 汪铁柱;血清及肺泡灌洗液CEA在肺癌诊断中的临床价值[D];福建医科大学;2011年

本文编号：2835131