人白细胞介素-18及其突变体hIL-18-I1e48Met的克隆与表达

发布时间：2020-10-20 10:57

　　 本文分别克隆并表达了人白细胞介素-18（human interleukin-18）和其突变体hIL-18-Ile48Met。从人外周血单核细胞（PBMC）经RT-PCR扩增得前体hIL-18，以此为模板PCR再扩增得到成熟hIL-18，构建pKKH-hIL-18重组体，转化到大肠杆菌DH5α，经异丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，hIL-18的表达量占细菌总蛋白的20%。以重叠延伸法实现点突变，由异亮氨酸突变为蛋氨酸，获得突变体hIL-18-Ile48Met，克隆到表达载体pBV220，转化到大肠杆菌DH5α,温控诱导表达。SDS-PAGE出现了约18KD左右的蛋白条带，表达量占细菌总蛋白的25%。
【学位单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：Q78
【部分图文】：

图 6 Overlap PCR 示意图 P1P5扩增上游片段 从 Pre-hIL-18 的 5′端开始到约 150 P2P6扩增下游片段 约 450bp 引物 P1P5扩增的 3′端增的 5′端为反向互补序列 见图71 2 3图 7. PCR 分别扩增上,下游片段1.下游片段 DNA (P2+P6)150bp450bp

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【参考文献】

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本文编号：2848593