内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞向内皮细胞分化的影响

发布时间：2020-10-22 07:07

　　 目的:探讨小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)条件培养基(CM)对同源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外成管能力及向内皮细胞(endothelial cells,ECs)分化的影响。方法:1.取5周龄左右的C57B/L6小鼠,获取骨髓细胞,利用全骨髓贴壁法和差速贴壁法分别获取MSCs和EPCs;2.使用流式细胞术分别检测MSCs和EPCs表面标记物的表达;3.通过双荧光染色和体外成管实验对EPCs进行功能鉴定;4.对实验进行分组:0%EPCs-CM组(对照组,采用全LG-DMEM培养)?25%EPCs-CM组(采用25%EPCs-CM+75%LG-DMEM培养)和50%EPCs-CM组(采用50%EPCs-CM+50%LG-DMEM培养),分别在培养1周、2周、3周时采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上述各组MSCs CD31?vWF?eNOS的mRNA表达情况;5.根据qRT-PCR结果,对实验再次分组,以50%EPCs-CM组为实验组与0%EPCs-CM组为对照组,利用免疫荧光检测各组MSCs CD31、CD34的表达情况;体外成管实验检测各组细胞的体外成管能力;使用NO试剂盒对各组上清液中的NO含量进行检测。结果:1.流式细胞术结果显示,第3代MSCs的Sca-1阳性表达率为93%,CD34和CD11b的阳性表达率分别为18.2%和31.9%;EPCs CD34、CD133和VEGFR2的阳性表达率分别为91.8%、67.4%和98.9%。2.EPCs可吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AC-LDL),使细胞呈红色荧光,并可以结合凝集素(UEA-1)而使细胞呈绿色。在基质胶上可形成管腔样结构。3.qRT-PCR显示3周时25%EPCs-CM浓度组CD31、vWF、eNOS mRNA的表达(1.45±0.81;1.47±0.92;3.79±0.85),vWF、eNOS mRNA的表达水平均较对照组升高显著,差异具有统计学意义(P0.05);50%EPCs-CM浓度组CD31、vWF、eNOS mRNA的表达(2.28±0.25,1.76±0.71,8.27±1.65),均较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。4.免疫荧光结果显示实验组MSCs表面CD31和CD34的表达明显高于对照组;实验组细胞成管能力明显强于对照组;对照组细胞培养上清液中NO的含量为(8.81±3.41)μmol/L,实验组细胞培养上清液中NO的含量为(20.93±9.47)μmol/L,较对照组明显升高,差异显著(P0.05)。结论:1.EPCs条件培养基能提高MSCs体外成管能力;2.EPCs条件培养基可促进MSCs体外向内皮细胞(ECs)分化。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R54
【部分图文】：

：MSCs 原代第 48h，多边形细胞为主；B：MSCs 第 3 代第 2 天，细胞呈细长梭形细胞为主；C：EPCs 原代第 7 天，长梭形细胞为主；D：EPCs 第 3 代第 3 天，细胞呈“铺路石”状。图 1 倒置光学显微镜下细胞形态学的变化(100×)Figure 1 Morphological characteristics of MSCs and EPCs (100×)

A：VEGFR2； B：CD34： C：CD133； D：CD11b； E：CD34； F：Sca-1图2 EPCs 和MSCs的表面标记物阳性率流式检测结果Figure 2 Cellular surface antigens on EPCs and MSCs detected by FCM1.5 双荧光染色鉴定 EPCs

A:Dil-AC-LDL; B: FITC-UEA-1; C:DAPI; D:Merge图 3 EPCs 的双标记染色Figure 3 Double marker staining of EPCs
【参考文献】

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6 李鹏;周长勇;尹磊;孟宪琴;张丽娜;;低氧对人脐带间充质干细胞活性和内皮分化能力的影响及VEGF的干预作用(英文)[J];中南大学学报(医学版);2013年04期

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本文编号：2851275