脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调IL-1Ra、IL-37分泌的研究

发布时间：2017-04-04 10:04

  本文关键词：脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调IL-1Ra、IL-37分泌的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)、白介素-37(interleukin-37,IL-37)的影响。方法(1)采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养UC-MSCs。(2)流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物的表达,鉴定UC-MSCs;检测UC-MSCs细胞周期。(3)CCK-8(Cell Counting Kit)法检测UC-MSCs的对数生长期。(4)实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测UC-MSCs上TLR4 m RNA的表达。(5)LPS不同剂量刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及酶联免疫吸附法(enzyme lin-ked immunosorbent assay,ELISA)分别从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs对IL-1Ra、IL-37的分泌。(6)LPS不同时间刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及ELISA分别从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs对IL-1Ra、IL-37的分泌。(7)TAK-242阻断TLR4后,Real-time PCR及ELISA分别从m RNA与蛋白水平检测其对LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37的影响。结果采用组织块法从脐带华通胶组织分离培养UC-MSCs,于75cm2塑料培养瓶中培养,原代培养7~10 d后,观察到组织周边爬出贴壁细胞,呈长梭形。流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物,UC-MSCs阳性表达CD29和CD105,不表达CD14和CD34,符合UC-MSCs的生物学特征。细胞生长曲线结果表明,UCMSCs传代培养在48-72 h进入对数生长期。流式细胞术检测UC-MSCs细胞周期,观察到G0/G1期占78.8%,S期占11.6%,G2/M期占9.6%,结果表明UC-MSCs大部分处于静止状态,其潜在的自我更新和增殖能力仍很强。Real-time PCR观察到UC-MSCs上表达TLR4 m RNA。1μg/m L LPS作用于UC-MSCs后,从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37呈时间依赖效应(P0.05)。TAK-242阻断TLR4后,LPS刺激UC-MSCs(即TAK-242+LPS组)较未阻断组(LPS组)分泌IL-1Ra、IL-37水平减少,其差异有统计学意义(P0.05),结果表明UC-MSCs对IL-1Ra与IL-37的分泌与TLR4激活有关。结论从脐带华通胶组织中分离培养出原代细胞,经鉴定为UC-MSCs;UC-MSCs阳性表达TLR4 m RNA;LPS可刺激UC-MSCs分泌抑炎细胞因子IL-1Ra、IL-37呈时间依赖效应,该过程主要依赖于TLR4。结果提示在炎症环境中,UC-MSCs可能通过分泌抑炎细胞因子IL-1Ra、IL-37来调节免疫活动,发挥抑炎效应。
【关键词】：脐带间充质干细胞 Toll样受体4 白介素-1受体拮抗剂 白介素-37
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 脐带间充质干细胞体外培养及生物学性质研究13-24
• 1 引言13
• 2 材料与方法13-18
• 2.1 主要仪器13-14
• 2.2 主要试剂14-15
• 2.3 实验方法15-18
• 3 实验结果18-23
• 3.1 脐带间充质干细胞体外分离及其培养18-20
• 3.2 脐带间充质干细胞传代培养20
• 3.3 鉴定脐带间充质干细胞20-21
• 3.4 脐带间充质干细胞的对数生长期21-22
• 3.5 脐带间充质干细胞的细胞周期22-23
• 4 小结23-24
• 第二部分 脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调IL-1Ra、IL-37分泌的研究24-47
• 1 引言24
• 2 材料与方法24-35
• 2.1 实验仪器24-26
• 2.2 实验试剂26-27
• 2.3 实验方法27-35
• 3 实验结果35-46
• 3.1 脐带间充质干细胞上表达TLR4 mRNA35
• 3.2 LPS不同剂量刺激UC-MSCs表达IL-1Ra、IL-37 mRNA35-37
• 3.3 LPS不同剂量刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白37-40
• 3.4 LPS刺激UC-MSCs表达IL-1Ra、IL-37 mRNA呈时间依赖效应40-41
• 3.5 LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白呈时间依赖效应41-43
• 3.6 TLR4介导脐带间充质干细胞分泌IL-1Ra、IL-3743-46
• 4 小结46-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-57
• 文献综述57-68
• 参考文献63-68
• 附录68-70
• 攻读学位期间的研究成果70-71
• 致谢71

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  本文关键词：脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调IL-1Ra、IL-37分泌的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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