小鼠铜绿假单胞菌气管插管滴注法肺部感染模型的建立及评价

发布时间：2020-10-24 15:25

　　 目的建立小鼠铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)肺部感染模型,并对该模型进行初步评价。方法采用一种快速无创的小鼠气管插管滴注法,将小鼠在透射灯照射下经口咽气管插管,滴注1×10~8 CFU/mL的铜绿假单胞菌悬液50μL,待接种感染7 d后处死,进行肺部菌落计数和病理学评价。结果经气管接种感染后,与对照组小鼠比较,感染组小鼠生理状态不佳,肺组织匀浆检出PA,血液中白细胞和中性粒细胞数目显著增多(P0.05),且出现肺部病理学改变,显示有炎症反应;对照组小鼠肺组织匀浆则未见PA生长,且血液中白细胞和中性粒细胞数目正常,未出现炎症反应。结论采用小鼠气管插管滴注法,通过呼吸道感染途径可成功建立小鼠肺部PA感染模型,该模型具有稳定性好,易定量的优点。
【部分图文】：

行组织病理学检查，并通过光学显微镜分析炎症的范围及程度。1．2．7统计学分析采用SPSS17．0统计软件对实验数据进行分析。所有计量数据均以x珋±s表示，两样本间均数比较采用独立样本t检验。检验标准α=0．05。2结果2．1生理状态考察首先考察了小鼠的活动状态、进食、饮水、毛发等生理情况，并检测了小鼠的体质量变化情况，结果如图1所示。对照组小鼠在适应环境后表现较好的活动能力，且能正常的进行进食和饮水，毛发也较柔顺光亮，小鼠体质量出现短暂下降后迅速恢复到正常体质量。与对照组小鼠相比，感染组小鼠在感染细菌24h后活动能力明显减弱，进食和饮水情况有所减少，毛发紊乱，并出现寒战表现，而且体质量明显下降。小鼠在感染细菌48h后体质量继续下降，感染72h后体质量有所恢复，但仍明显低于对照组。其原因可能是小鼠肺部感染细菌后引起肺部炎症及其他病理反应，导致各种不适，故引起小鼠食欲下降，体质量减轻。302520151234567对照组感染组时间/d体质量/g图1对照组和感染组小鼠体质量变化情况2．2血常规分析小鼠感染细菌7d后，将小鼠进行处死，取小鼠眼球血进行血常规分析，结果如图2所示。血常规分析结果表明，感染组小鼠血液中白细胞数目和中性粒细胞数目显著高于对照组，存在统计学差异(P＜0．05)，并超过了正常理论值的范围。此结果表明小鼠感染细菌后，有炎症发生，初步证实已成功构建感染模型。2．3肺组织匀浆菌落计数对感染组和对照组各10只小鼠肺部组织进行细菌培养实验，结果发现细菌感染组小鼠肺组织培养出乳白色、大小不等、表面光滑湿润、边缘不规则的?

单胞菌菌落，而对照组则未培养出铜绿假单胞菌。同时取肺组织匀浆后进行菌落计数，以每克肺组织所含菌落数来表示肺组织匀浆菌落计数。菌落计数结果表明，感染组细菌计数为(6．15±0．64)×106CFU/g，均超过106CFU/g，符合急性肺部感染指征［10］，而对照组在对应浓度下则未检出细菌菌落。该结果也说明通过气管插管滴注法成功建立了小鼠细菌肺部感染模型。1614121086420对照组感染组白细胞中性粒细胞细胞计数(109/L)aaa:P＜0．05，与对照组比较图2对照组和感染组小鼠血液中白细胞和中性粒细胞计数(x珋±s)2．4肺组织病理切片小鼠肺部组织切片的病理观察如图3所示。HE染色病理切片显示，感染组小鼠肺组织可见大量炎性细胞浸润，肺泡壁结构破坏，上皮细胞脱落，肺泡壁及肺泡腔可见弥散的红细胞，而正常对照组则未见异常。另外，通过观察新取的肺部组织外观，发现感染组小鼠的肺组织有不同程度的充血、水肿及出血表现，且肺组织颜色明显加深，而对照组肺组织则无其他异常变化。该结果证明采用气管插管滴注法成功建立了肺部细菌感染模型。20滋m20滋mAB→→→A:对照组;B:感染组;箭头示肺泡壁结构破坏，炎性细胞浸润，可见弥散性红细胞图3对照组和感染组小鼠肺部组织HE染色观察(×200)3讨论铜绿假单胞菌是全球公认的医院获得性感染最常见、最重要的致病菌之一［11］，该菌具有易定植、感染率高，易耐药的特点。近年来由于抗生素的应用愈发广泛，该菌耐药性逐渐上升，给临床治疗带来了严峻的挑战［12］。研究表明，引起医院获得性肺炎和呼吸道感染029
【参考文献】

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本文编号：2854634