乙型肝炎病毒e抗原反式激活作用的研究

发布时间：2020-10-26 17:54

　　 乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒。在我国它是导致肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因。HBeAg是由HBV DNA前-C基因与C基因区共同编码的一种非颗粒性的分泌蛋白，随HBV复制而增加，临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。 为研究HBeAg在HBV感染后病毒致病过程中的作用，我们以分子生物学技术构建HBeAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBeAg，以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBeAg转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照，制备转染后的细胞裂解液。应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术， 构建HBeAg激活相关基因差异表达的。DNA消减文库，筛 选相关的靶基因片段，将产物与T/A载体连接，构建CDNA 消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克 隆多聚酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析。 对转染后的细胞裂解液同时应用基因表达谱芯片技术对 差异表达mRNA进行检测和分析。筛选到的cDNA全长序 列，包括一些与细胞生长调节、细胞内信号转导、蛋白 质翻译合成、肿瘤、神经系统发生及物质代谢密切相关 的蛋白编码基因，推测了HBeAg在体内可能存在的调控 机制的线索，并发现一个未知功能的基因，命名为HBeAg 反式激活蛋白(HBeAgTP)。 在新基因功能的研究方面，我们对HBeAgTP进行了 初步探讨。从人肝癌细胞中得到了HBeAgTP基因的全长 编码序列，构建与绿色荧光蛋白融合的表达载体 PEGFP一HBeAgTP，通过基因与荧光蛋白基因融合表达，明 确它的亚细胞定位主要在细胞浆。进一步应用酵母双杂 交技术筛选HBeAgTP与肝细胞文库结合的蛋白，包括一 些与细胞内蛋白质的翻译、免疫调节及物质和能量代谢 相关的基因。对该基因的功能进行初步研究，为下一步 更加具体的生物学功能、基因表达调控的深入研究开辟 道路。
【学位单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R346
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
主要仪器设备
英文缩略词
前言
第一部分 抑制性消减杂交技术筛选HBeAg反式调节基因
    引言
    第一节 HBeAg表达载体的构建
    第二节 抑制性消减杂交技术筛选HBeAg反式调节基因
    讨论
第二部分 HBeAg反式调节基因的表达谱芯片实验
    引言
    讨论
第三部分 HBeAgTP克隆化及功能学研究
    引言
    第一节 HBeAg反式激活蛋白（HBeAgTP）的克隆化
    第二节 HBeAgTP的亚细胞定位
    第三节 HBeAgTP肝细胞内结合蛋白的研究
    讨论
总结
文献综述
攻读硕士学位期间发表的文章
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前8条

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本文编号：2857318