人精子膜蛋白cDNA（HSD-1）的表达和功能研究

发布时间：2020-11-02 04:45

　　 免疫避孕是指应用免疫学的原理和方法对人类生育力进行调控，它是近十多年来世界各地科学工作者正在积级进行研究的一类新的避孕方法。 大量的研究报道表明，生殖系统的许多成分，如精子、卵子、生殖激素等均具有抗原性。针对机体精子抗原、卵表面抗原以及生殖激素抗原发生的免疫反应会干扰生育的生理调节过程，这是免疫避孕的理论基础。 应用免疫学的方法调控人类生育力可以有几种不同的途径。其中最有实用意义的途径是应用生殖系统的抗原进行主动免疫。即应用疫苗进行免疫。这一途径的优点在于一次或数次免疫后能诱发较长时间的免疫力，它的抗生育效应是通过诱发的抗体或活化的淋巴细胞或两者的共同作用而实现的。 应用疫苗进行避孕的一个最关键的问题是能发现一个精子特异的，且具有强免疫原性的抗原。本课题组从70年代末期开始涉猎这一研究领域。到目前已经纯化了数种具有强免疫原性的精子蛋白；克隆了一些与生育过程相关的蛋白的cDNA。其中一个cDNA HSD-1，是应用含有抗精子抗体的不育病人的血清从人睾丸cDNA文库中筛选得到的。提示这个基因编码的蛋白质可能在生殖过程中起作用。本文在此基础上对HSD-1cDNA及其可能含有抗原决定簇的片
【学位单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：1997
【中图分类】：R321
【部分图文】：

或HindHI酶切，分别可以切出约550bp的片段。因此可以确定pQE30舰sD一l(55obp)为构建正确的重组质粒。此外，我们又对此重组质粒进行了测序验证。图8为pQE3o舰SD一l(550bP)的测序结果。Lanel，LambdaDNA/HindlllMarkerLaneZ，pQE3oH/SD一l(550bp)质粒Lane3，PQE30H/SD一1(55ObP)B/amHILane4，PQE30旧SD一I(550bP)H/indlllLanes，PBR322/BstNIMarker2345图7，pQE3o沮SD一l(55obp)重组质粒的酶切鉴定一一一一一.一8l

中国协和医科大学博士研究生毕业论文结果将经酶切鉴定和测序后确定为正确的质粒，转化入EochM巧菌.进行PITG诱导表达。12%SDS一PAGE检测蛋白质表达情况，见图3Lna4ec由电泳图谱可见pQE30舰SD一1(55b0P)在PITG诱导3小时后，得到高效表达，表达蛋白占细菌SDS一裂解液总蛋白的25.5%，图o9

巾国协和医科大学博士研究生毕业论文4抗HSD一1多克隆抗体的制备抗Hsn一l多克隆抗体由美国Inc(Denver，pA)制备。1.smg纯化的表达备抗体，ELISA法测得抗体的滴度为1x为了进一步鉴定抗体的特异性，认卫STERNBLOT，抗体的稀释度为1:不同大小的表达蛋白5k5d、2盈kd和14kd
【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 缪时英,李月华,周荔申,陈雅娣,白云,王琳芳,严缘昌;一种人精子膜蛋白基因的克隆与鉴定[J];基础医学与临床;1990年06期

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3 梁植权,王琳芳,缪时英,赵敏顺,曹淑兰,吴炳瑛,柯林林;精子膜蛋白的研究Ⅰ.具有同种抗原性的兔精子膜蛋白A的分离[J];中国医学科学院学报;1980年03期

4 王琳芳,缪时英,曹淑兰,吴炳瑛,柯林林,梁植权;精子膜蛋白的研究——Ⅲ、兔精子膜蛋白“A”的定位及其酯酶活性的观察[J];中国医学科学院学报;1982年02期

本文编号：2866588