具C1q抑制活性C1q结合短肽的研究

发布时间：2020-11-02 22:03

　　 补体系统在机体抗感染第一线防御中起重要作用，另一方面，补体异常(包括程度和部位)活化也参与许多疾病的发生和发展。因此，抗补体治疗一直是补体学研究中的重要领域之一。人们先后尝试过许多抑制补体激活的途径，但都存在或多或少的问题。目前的焦点集中在新一代基因工程补体调节蛋白(complement regulation protein，CRP)的研制，但难度很大。本研究另辟蹊径，以补体经典激活途径始动分子C1q为靶标，采用噬菌体肽库技术，亲和筛选能与C1q结合的噬菌体克隆，研制可抑制补体激活的C1q模拟短肽。 我们用IgG-Sepharose 4B亲和层析将C1q与C1r_2C1s_2分离，然后以DEAE-Sephacel离子交换层析将C1r和C1s分离，用C1q McAb-Sepharose 4B亲和层析将C1q进一步纯化，在分离C1r和C1s的整个过程中加入蛋白水解酶抑制剂PMSF和NPGB，并控制温度在4℃、pH6.1、无二价阳离子的条件下，得到高度纯化的C1q和酶原形式C1r和C1s。然后，采用噬菌体肽库技术，以C1q为钓饵蛋白，从12肽库和环7肽库中亲和筛选能与C1q结合的噬菌体克隆，经ELISA、U937细胞配体结合抑制试验、AIgG竞争抑制试验及DNA测序，获得了9个具C1q抑制活性克隆的DNA序列，其相应的氨基酸序列为：WYEGPFTLYTWP、HWDPFSLSAYFP、LTQHNSPFFLLP、TSNPFFLWYPQP、QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP，它们可能模拟C1qR和／或IgG的C1q结合表位并抑制C1q的活性。这些结果，为研制新型肽类药物进行抗补体治疗奠定了基础。
【学位单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R392
【部分图文】：

sns一PAGE分析elq、eir和elsFig·4Non一redueingandredueingSDS一PAGEanalysisofClq，ClrandCls

5WestemBlot鉴定Clq、Clr和Cls非还原Clq、Clr、Cls经SDS一PAGE分离后用相应的特异性抗体进行westemblot分析，结果如图5所示。一16一

12一3噬菌体肤库克隆DNA序列4P12一噬菌体肤库克隆DNA序列
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本文编号：2867630