大鼠子宫腔粘连模型的构建与改进

发布时间：2020-11-18 09:48

　　 目的宫腔粘连是一种严重损害女性生殖健康的疾病。为了进一步研究宫腔粘连的发生机制,采用经典的子宫内膜刮除法制作宫腔粘连大鼠模型,并对该模型进行评价和改进。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、子宫内膜刮除组和子宫内膜及部分间质刮除组,每组20只。假手术组打开宫腔后即缝合并关腹。子宫内膜刮除组用刀片刮除双侧子宫内膜。子宫内膜及部分间质刮除组用刀片刮除双侧子宫内膜和间质层,直至表面有粗糙感为止。术后3、7、14、21、28 d取材,行组织学和免疫组织化学评估。结果刮宫后两组大鼠子宫内膜上皮层消失,子宫内膜刮除组大鼠术后7 d可发现重新长出的子宫内膜。而子宫内膜和部分间质刮除组大鼠各时间点组织学染色见上皮层消失,间质减少50%以上,腺体数目减少,子宫内膜纤维化面积比随着刮宫时间延长而增高。刮宫后转化生长因子β1的表达增高,基质金属蛋白酶9的表达降低。与宫腔粘连发生的机制相符。结论刮除子宫内膜和部分间质能够制备出大鼠宫腔粘连的模型;该宫腔粘连大鼠模型能反映宫腔粘连的组织学和病理学变化,可用于宫腔粘连的实验研究。
【部分图文】：

Vol．50，No．1陈醒等．大鼠子宫腔粘连模型的构建与改进·125·21d、刮宫28d的子宫内膜纤维化面积比(%)分别为25.34±1.00、36.21±1.04、40.27±1.42、49.41±1.07、53.19±1.10、53.64±1.13。刮宫各组的子宫内膜纤维化面积比均显著大于对照组(P＜0.01)。图1子宫内膜刮除前后的HE染色标尺示100μm(下同)A．假手术组子宫内膜上皮和腺体可见;B．单纯子宫内膜刮除后，子宫内膜上皮层消失，剩余较多子宫内膜腺体和间质层;C．子宫内膜和大部间质刮除组，子宫内膜间质和腺体大量减少图2单纯子宫内膜刮除组刮宫3d(A)和7d(B)时的HE染色刮宫3d时，尚未见增生的子宫内膜上皮;刮宫7d后，已见子宫内膜上皮增生，说明模型制作失败，子宫并未形成粘连图3子宫内膜刮除前后CK18的表达情况A．假手术组子宫组织内膜上皮和腺上皮均表达CK18;B．子宫内膜刮除后，只有腺上皮表达CK18图4各组子宫组织的Masson染色胶原纤维染成蓝色，腺体、肌层染成红色A．假手术组子宫;B．刮宫3d;C．刮宫7d;D．刮宫14d;E．刮宫21d;F．刮宫28dFig．1HEstainingofuteribeforeandafterscrapingBar=100μm(Thesamebelow)A，Theendometriumandendometrialglandswereseenintheuterusofshamoperation;B，Noepitheliallayersofendometriumwereseenwhilesomeendometrialglandsandlayersofmesenchymewereseenintheuterusofendometrialscraping;C，EndometrialglandsandmesenchymeweresignificantlydecreasedintheuterusofendometriumandmesenchymescrapingFig．2HEstainingofuteriafter3days(A)and7days(B)ofoperationintheendometrialscarpinggroupNoepithelialcellsofendometriumwereseenafter3daysofoperationwhileregenerativeendometriumwasseenafter7daysofoperation，suggestingthatnofibrosi

·126·解剖学报50卷，1期料染细胞核(蓝光)，FITC(绿光)标记的二抗染TGF-β1和MMP-9。结果发现，TGF-β1和MMP-9均表达于胞质和细胞外基质中。假手术组子宫中低表达TGF-β1，刮宫后TGF-β1的表达升高(图5);假手术组子宫中高表达MMP-9，刮宫后MMP-9的表达下降(图6)。图5免疫荧光法检测各组子宫TGF-β1表达标尺示100μm(下同)A．假手术组子宫;B．刮宫3d;C．刮宫7d;D．刮宫14d;E．刮宫21d;F．刮宫28d刮宫后子宫组织的转化生子因子β1表达明显高于对照组图6免疫荧光法检测各组子宫MMP-9表达A．假手术组子宫;B．刮宫3d;C．刮宫7d;D．刮宫14d;E．刮宫21d;F．刮宫28d刮宫后子宫组织的基质金属蛋白酶9表达明显低于对照组Fig．5TGF-β1expressioninshamandendometrialandmesenchymalscrapinggroupbyimmunofluorescenceBar=100μm(Thesamebelow)Sham(A)，3(B)，7(C)，14(D)，21(E)and28(F)daysaftersurgerywereshown，respectively;TheexpressionofTGF-β1inscrapeduteriwerehigherthancontrolgroupFig．6MMP-9expressioninshamandendometrialandmesenchymalscrapinggroupbyimmunofluorescenceSham(A)，3(B)，7(C)，14(D)，21(E)and28(F)daysaftersurgerywereshown，respectively;TheexpressionofMMP-9inscrapeduteriwerelowerthancontrolgroup讨论由于伦理问题，宫腔粘连患者病理取材困难，制约着宫腔粘连的机制研究。因此，制备动物的宫腔粘连模型对于推动宫腔粘连的研究有重要意义。宫腔粘连动物模型制备方法很多，物理性方法(机械
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