葡萄糖、胰岛素和低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤及左归降糖灵的调节作用

发布时间：2020-11-20 07:12

　　 目的：以人脐带静脉内皮细胞株ECV-304为受试对象，观察不同浓度的葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白对ECV-304细胞的协同损伤作用，建立一种糖尿病合并脑梗死的体外内皮细胞损伤模型；观测滋阴益气活血方左归降糖灵提取液(ZGJTL)对该细胞损伤模型的调节作用。 方法：本实验分前后两部分。第一部分，取传代的ECV-304细胞(第三至四代)，采用正交设计方法L9(3~4)，将生长融合状的血管内皮细胞随机分为9组，分别施加不同浓度的葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白条件液，培养24h后观测指标①光镜观察细胞一般形态学改变；②MTT法检测细胞活性；③琼脂糖凝胶电泳DNA ladder分析细胞凋亡情况；④透射电镜观察细胞超微结构形态学变化。综合分析找出最佳协同损伤细胞模型。第二部分，在损伤细胞模型建立的基础上，将其随机分为5组，即模型组，低、中、高剂量的ZGJTL组和达美康组，另设一正常生长细胞组(不含牛血清的DMEM／F12液培养的空白组)，继续培养48h后检测指标：①光镜观察细胞一般形态学改变；②MTT法检测各组细胞活性；⑨透射电镜观察细胞超微结构；④测定细胞培养液中的tPA、PAI-1含量，NO、ET-1含量以及ICAM-1含量。 结果：①正交试验表明20mmol／L葡萄糖，30mU／L胰岛素加200mg／L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的混合条件液对细胞的损伤明显(P＜0.05)，倒置显微镜下见细胞回缩变圆，轮廓分明，细胞内出现粗糙颗粒样变化；透射电镜亦观察到该组细胞线粒体肿胀，嵴丢失，大多呈空泡变，多数细胞已呈凋亡或坏死样改变，内质网结构模糊，肿胀，呈小泡状；MTT法检测细胞活性，该组细胞活性显著降低(P＜0.05)；琼脂糖凝胶电泳见可凋亡细胞典型的阶梯状区带电泳图谱(DNA ladder)。 综合分析认为该组细胞是最佳的损伤模型。②倒置显微镜下可见，ZGJTL 中齐」量组比模型组的细胞形态总体上形态正常者居多，紧密排列的细胞 较模型组要多，圆缩形、轮廓增强的细胞较少，颗粒状物也较少，与达 美康组比较无明显差异。透射电镜下观测，中剂量的ZG JTL组可以减轻 细胞的损伤，见细胞内大多数线粒体结构清晰，但仍有部分线粒体哈丢 失，成空泡状，病变情况介于正常组与模型组之间。③MTT法测得各组 0D值，结果显示:模型组较正常组细胞活力明显下降(P0.似);中、 高剂量的ZGJTL和达美康均可以提高模型组的细胞活力，具有显著性意 义(六0.05)，但达美康组和中、高剂量ZGJTL组之间比较细胞活力无 统计学差异(乃0.肠)。④检测细胞培养液中的tPA、PAI一1含量，N0、 ET一1含量以及I以M一1，发现对照药达美康可以促进正常细胞以及模型 组细胞分泌tPA(P0.05)，其他各组tPA含量无显著性差异;而 PAI 的含量各组差异较大，模型组较空白对照组显著升高(六0.时)，低剂 量、中剂量和高剂量的ZGJTL均能显著抑制这种升高趋势(只0.以)， 达美康亦能显著抑制这种升高趋势(六0.01)，且达美康抑制程度显著 高于低剂量，中剂量，高剂量的ZGJTL(分别为只0.01，只。:01，只0.05)。 模型组较空白对照组N0含量显著降低(只0.05)，达美康和高剂量以 及中剂量的ZGJTL能够显著升高模型组的N0含量(均为只 0.01)，达美 康的这种升高N0含量的能力显著大于中剂量的zc JTL(p0.时)，但 却显著地低于高剂量的ZGJTL;中、高、低剂量ZGJTL以及达美康均可 抑制模型组ET一l分泌增加(只0.05)，同时与达美康比较，中、低剂量 ZGJTL降低ET一1更显著(六0.05)，而高剂量的ZGJTL组和达美康组之 间却差异不显著(外0.05);中剂量的ZGJTL和达美康可以逆转模型组 较正常组的工CAM一1升高(只0.01)，而低剂量和高剂量的ZGJTL抑制 作用却不显著(与模型组比较，乃0.05)，中剂量的ZGJTL较达美康， 其抑制ICAM一1升高作用要优(六0.01)。 结论:20 mmOI/L葡萄糖，3omU/L胰岛素加2的mg/L熟化型低密 度脂蛋白的混合条件液对细胞的损伤明显，可以诱导细胞发生凋亡和坏 死样变化，且可出现促凝和抑制纤溶，以及介导细胞秘附等功能改变， 有利于血栓形成，在糖尿病血管并发症特别是脑梗死的病理演变中可能 具有重要的意义;而ZGJTL和达美康均可不同程度的抑制这些病理改变， 且在不同的病理机制中ZGJTL和达美康所起到的作用各有强弱。33似 g/m1的达美康升高N0和降低ET一1的能力显著强于20mg/ml zGJTL(中 剂量组)和10mg/ml ZGJTL(低剂量组)，而50fng/ml ZGJTL(高剂量组) 的作用却比达美康强;达美康以及低中高剂量的ZGJTL均可以降低以I 的分泌，比较而言，33”g/耐的达美康这种作用比三个剂量组的ZGJTL; 而达美康和不同剂量的ZGJTL对tPA的分泌均没有显著作用;在工以M一1 的千预中，33林g/ml的达美康和20mg/ml的ZGJTL均可以抑制ICAM一1 的分泌，而10mg/ml和50mg/m一的ZGJTL却没有这样的功能，20mg/ml的 zGJTL这种抑制作用强于33，g/In1的达美康。
【学位单位】：湖南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R363;R285
【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
英文摘要
第一部分 葡萄糖、胰岛素和低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤模型的建立
    1 材料与方法
    2 结果
    3 分析与讨论
第二部分 左归降糖灵抗葡萄糖、胰岛素和低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的调节作用
    1 材料与方法
    2 结果
    3 分析与讨论
结论
参考文献
致谢
附录
    1 、 附图
    2 、 综述

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 杨兵全,范振华;糖尿病大血管并发症危险因素及干预对策[J];国外医学.内分泌学分册;2002年02期

2 柴伟栋,陈家伟;糖尿病内皮依赖性血管舒张减弱及其发生机制[J];国外医学.内分泌学分册;1999年02期

3 任艳;2型糖尿病合并高甘油三酯血症发病机制探讨[J];国外医学(内科学分册);2000年05期

4 刘春风,包仕尧;高血压、糖尿病与脑卒中[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1991年02期

5 邓奕辉,李定祥,陈大舜;降糖通脉方对糖尿病合并缺血性脑损伤模型大鼠的影响[J];湖南中医学院学报;2002年01期

6 陈大舜,易发银,喻嵘,葛金文,彭延古,邓奕辉,付灿云;左归降糖灵相关药物对小鼠实验性高血糖的影响[J];湖南中医学院学报;1997年02期

7 葛金文,朱惠斌,彭延古,喻嵘,邓奕辉;益气活血方对肿瘤坏死因子诱导血管内皮细胞释放反应的影响[J];湖南中医学院学报;1998年04期

8 喻嵘,葛金文,陈大舜,易法银,邓奕晖,吴勇军,朱传湘;左归降糖方对实验性糖尿病大鼠糖代谢及胰岛功能的影响[J];湖南中医学院学报;1999年01期

9 葛金文;益气活血方对肿瘤坏死因子诱导血管内皮细胞释放反应的影响[J];江西中医药;1999年02期

10 庞素华,黄文龙;糖尿病合并脑梗塞脑血管舒缩反应能力的研究[J];临床荟萃;1998年17期

本文编号：2891138