人类CD154反义RNA真核表达载体的构建及其对Jurkat细胞CD154表达的影响

发布时间：2020-11-20 18:53

　　 目的 构建并鉴定人CD154反义RNA的真核表达载体，通过观察其对Jurkat细胞CD154分子表达的影响，确定其有效性。 方法 从正常人外周血单个核细胞提取mRNA，利用RT-PCR扩增CD154胞外段序列，使用T-A克隆技术形成PCR产物的克隆-pUCm-T／CD154，并进行基因测序。根据测序结果，应用亚克隆技术反向接入真核表达载体-pcDNA3，构建载体／目的基因片段重组体-pcDNA3／CD154，双酶切法进行鉴定。以脂质体为介质将其转导到Jurkat细胞中，利用流式细胞仪，检测未受PHA-P刺激、刺激24h和刺激48h三个不同时间CD154的表达情况，对照组为转导pcDNA3空载体组。 结果 1 人CD154反义RNA的真核表达载体经双酶切检验证明构建成功。2 在各个时段，转导pcDNA3／CD154的实验组Jurkat细胞CD154的表达均较转导pcDNA3空载体对照组明显减少。 结论 成功的合成了反义RNA真核表达载体-pcDNA3／CD154，此载体可有效的降低Jurkat细胞CD154分子的表达。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R346
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 CD154反义RNA真核表达载体的构建和鉴定
第二部分 CD154／pcDNA3对Jurkat细胞CD154表达影响的检测
总结
参考文献
附图
综述： CD40和CD154与疾病的关系
致谢
个人简历

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本文编号：2891839