人胰岛素一步法固相酶促半合成的研究

发布时间：2020-11-21 19:28

　　 胰岛素是治疗糖尿病的特效药物,糖尿病是最常见的内分泌代谢疾病。单组分人胰岛素已成为目前治疗糖尿病的首选药物。与基因工程生产人胰岛素相比,猪胰岛素酶促半合成人胰岛素的方法简便有效,且我国猪资源丰富,半合成所需猪胰岛素来源充分,研制生产所需的投资少,周期短,符合我国现阶段国情。由于一步法固相酶促半合成人胰岛素的方法具有一系列优点,实用价值更高,因此,人胰岛素的一步法固相酶促半合成便成为一个重要课题。 本文报道了用固定化胰蛋白酶催化猪胰岛素一步法合成人胰岛素的工艺。合成了优质且高含量的苏氨酸叔丁醚叔丁酯,纯度可达98.5%,收率稳定;快速制备高活力的固定化胰蛋白酶,活力单位高达5990.5U/g,该工艺具有更为快捷简便的特点。以猪胰岛素和苏氨酸叔丁醚叔丁酯为原料,固定化胰蛋白酶催化,通过一步转肽法半合成人胰岛素,转肽率可达75.1%。制得的人胰岛素经鉴定和纯度检测,结果为:PAGE和SDS-PAGE为单一蛋白带,迁移率与人胰岛素标准品一致;HPLC为单一蛋白峰,保留时间与人胰岛素标准品相同。
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R341
【部分图文】：

12345图2聚丙烯酞胺凝胶电泳图谱Fig2PolyaerylamidegeleleetroPhoresis(PAGE)1·Pl2.Hl·E(erudeProduet)3·Hl(debloekedProduct)(PurifiedProduct)5.Nov一NordiskHl人胰岛素酣分离纯化结果QSepharoseFF阴离子交换层析分离H工一ester图谱见

QSepharoseFF离子梯度层析纯化Hl图谱PurifieationofHlonQ一SePharoseFastFlowioneolumn(2.0x11em)waselutedby45%ethano5归e卜扣.bgl诗口TFNH4CI);Flowrate:.0·smllmin.7人胰岛素的鉴定结果7.1聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)结果:通过12%APGB，对产品进行鉴定，见图2。结产品为单一蛋白带，与人胰岛素标准品蛋白带位7.2SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS一PAGE)结果:通过15%SDS一PAGE，对产品进行鉴定，结果显分子量与人胰岛素对照品相同，且纯度较高，为
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1 周蕊;人胰岛素一步法固相酶促半合成的研究[D];四川大学;2004年

2 高秀蓉;人胰岛素固相酶促半合成及其工艺的研究[D];四川大学;2005年

本文编号：2893486