A型产气荚膜梭菌α-毒素基因的克

发布时间：2020-11-22 01:10

　　 A型产气荚膜梭菌是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症及人类创伤性气性坏疽的主要病原菌之一,其致病因子是菌体产生的α-毒素,目前尚无有效的防治方法。本研究利用分子生物学技术,克隆、表达了α-毒素基因,对α-毒素免疫原性进行了研究,研究内容和结果如下: 用PCR方法从A型产气荚膜梭菌α-毒素高产菌株C57-1中克隆出了1194 bpα-毒素基因,经与Genebank列于前三位α-毒素基因序列比较,其同源性高达99%,从而为研究α-毒素基因表达产物免疫原性提供了可靠的基因材料。 构建的表达菌株pXETA02经ELISA鉴定,能够特异性地表达出α-毒素蛋白。研究了以IPTG和乳糖两种为诱导剂在不同条件下对α-毒素表达的影响。IPTG在优化条件下诱导重组α-毒素表达,目的蛋白占菌体总蛋白最高比例达35%。乳糖在优化条件下诱导重组α-毒素表达,目的蛋白占菌体总蛋白最高比例达23%。从而为大规模发酵培养重组α-毒素提供参考数据。 对重组α-毒素进行了生物毒性测定和免疫原性研究,我们所获得的重组α-毒素丧失了天然毒性,但却有良好的免疫原性,从而为生产重组α-毒素基因工程疫苗提供了良好的候选菌株。 本研究获得了理想的α-毒素基因材料及其表达菌株,这将为下一步研究α-毒素基因突变和含α-毒素多价基因工程疫苗打下坚实的基础。
【学位单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R378
【文章目录】：
第一章 引言
第二章 A型产气荚膜梭菌α—毒素基因的克隆与基因功能预测
    2.1 实验材料
    2.2 常用培养基和溶液的配置
    2.3 实验方法
    2.4 结果与分析
    2.5 讨论
第三章 α—毒素基因表达质粒的构建
    3.1 实验材料
    3.2 常用培养基和溶液的配置
    3.3 实验方法
    3.4 结果与分析
    3.5 讨论
第四章 α—毒素基因高效表达条件的优化
    4.1 实验材料
    4.2 常用培养基和溶液的配置
    4.3 实验方法
    4.4 结果与分析
    4.5 讨论
第五章 A型产气荚膜梭菌α—毒素免疫原性研究
    5.1 实验材料
    5.2 常用培养基和溶液的配置
    5.3 实验方法
    5.4 结果与分析
    5.5 讨论
第六章 结论
参考文献
综述
    综述参考文献
致谢
作者简历

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 赵志军,许崇波,曾瑾,王玉炯;A型产气荚膜梭菌α毒素基因的高效表达[J];生物技术;2004年05期

2 许崇波,朱平,姚湘燕,甘永华,冯书章,马从林,孟锐奇;产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物的免疫原性研究[J];畜牧与兽医;1998年06期

本文编号：2893876