重组人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与活性鉴定

发布时间：2020-12-05 03:31

　　乙型肝炎是一种世界范围的流行性传染病,但目前还没有有效的治疗手段,因此预防是防治乙型肝炎的重点。血源性抗乙肝表面抗原抗体可用于乙型肝炎的被动免疫,防止乙型肝炎的母婴垂直传播。但是,血源性抗体的来源有限且具有潜在的传染性,给它的应用带来限制。开发重组人源性抗HBsAg抗体,可以实现抗体的工程化大规模生产,而且使用安全,可以弥补血源性抗体的缺陷,取代血源性抗体,因此具有良好的社会效益和经济效益。 我们将针对HBsAg preS2区表位的人源性单链抗体基因转入大肠杆菌中表达,表达量可达菌体总蛋白的30%,并且目的蛋白在胞内形成包涵体。经Ni离子金属螯合亲和层析、凝胶层析两步纯化,重组抗体的纯度达到97%。将纯化后的单链抗体进行了复性。在优化复性方法后,在抗体浓度为0.34mg/mL时,蛋白收率可达50%。而且复性后的抗体具有较好HBsAg结合活性,其亲和常数达到0.23×10⁸,同时测定了一株鼠源单克隆抗体的亲和常数,结果表明单链抗体的亲和力为一株鼠源单克隆抗体的十六分之一。竞争ELISA的结果表明,我们的单链抗体可以抑制一株鼠源单克隆抗体与HBsAg的结合,抑制... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pREp4的限制性图谱〔2，〕.图2一3pQE40质粒形体图

.1scFv基因的获得PCR产物的琼脂糖电泳结果如图4一1所示，在750bp处有较清晰的条带，而此sFcv基因片段的理论长度为76b3p，初步确认其为ScFv基因的PCR产物。将其切下并胶回收，用所得到的DNA进行下一步实验。4.1.2重组子的鉴定随机挑取3个转化子，扩增后小提质粒，用BamHI、HindIH双酶切，琼脂糖电泳结果显示所有克隆均切出一条750bp左右的片段，与插入目的基因片段的理论长度(757bp)相符

直接稀释法透析法复性方式的比较图4一9不同方法复性后的蛋白回收率及相对比活性Fig.4一9DependeneeoftheproteinreeoveryandrelativesPeeifiebioaetivityonthemethodsofrefolding37


本文编号：2898792