27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响
发布时间：2020-12-05 18:54
为探讨27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化影响,构建27nt-miRNA过表达、反义序列Anti-27nt-miRNA以及阴性对照的表达质粒,慢病毒包装后分别转染人脐带间充质干细胞（hUCMSC）,加入Ⅳ型胶原诱导hUCMSC定向分化为血管平滑肌细胞。四唑盐（MTT）比色法检测分化后细胞活力,免疫细胞化学染色法检测分化后细胞SM22α（兔抗平滑肌22α,smooth muscle 22α）的表达,Western印迹法和RT-PCR检测分化后细胞内的SMA （兔抗平滑肌肌动蛋白,smooth muscle actin） mRNA、SM 22α mRNA及其蛋白质表达情况。经检测,27nt-miRNA过表达分化组与阴性对照组相比,细胞活力下降20.48%（P<0.05）,SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量明显升高（P<0.05）;而Anti-27nt-miRNA分化组细胞活力上升了18.07%（P<0.05）,SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量下降（P<0.05）。综上所述,27nt-miRNA能够促进间充质...
【文章来源】：生物工程学报. 2019年02期 第290-297页 北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
显微镜下观察到hUCMS的转染情况
ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程学报ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn294图2MTT检测27nt-miRNA对细胞活力影响Fig.2MTTdetectstheeffectof27nt-miRNAoncellviability.xs.n=3.*P<0.05vs.NC.P<0.05)，而Anti-27nt-miRNA组升高18.07%(0.83±0.03vs.0.98±0.07，P<0.05)。以上结果提示，27nt-miRNA抑制hUCMSC分化后细胞的活力。2.327nt-miRNA对VSMC分化标志物SM22α表达的影响用免疫细胞化学染色方法(ICC)检测分化后各组细胞中的VSMC特异性蛋白SM22α的表达量，如图3所示，SM22α蛋白主要表达于细胞胞浆，阳性染色呈棕黄色颗粒。运用IPP6.0软件对SM22α蛋白表达量进行计算：平均光密度(Meanopticaldensity)越大，SM22α蛋白表达越高。与阴性对照NC组比较，27nt-miRNA组SM22α表达量增加63.64%(0.22±0.02vs.0.36±0.04，P<0.05)；而Anti-27nt-miRNA组SM22α表达量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。结果提示，27nt-miRNA促进了VSMC分化标志物SM22α表达。2.4RT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA的影响用RT-PCR检测分化后各组细胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表达水平(图4)。与阴图3免疫组化检测27nt-miRNA对细胞SM22α蛋白表达的影响Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.图4PT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA表达的影响Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexp
SM22α表达量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。结果提示，27nt-miRNA促进了VSMC分化标志物SM22α表达。2.4RT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA的影响用RT-PCR检测分化后各组细胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表达水平(图4)。与阴图3免疫组化检测27nt-miRNA对细胞SM22α蛋白表达的影响Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.图4PT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA表达的影响Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexpressionofSMAmRNAandSM22αmRNAwasdetectedbyRT-PCR.xs.n=3.*P<0.05vsNC.性对照NC组比较，27nt-miRNA组的SM22αmRNA表达量增加31.40%(0.86±0.03vs.1.13±0.08，P<0.05)、SMAmRNA表达量上升25.00%(0.72±0.03
【参考文献】：
期刊论文
[1]27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响[J]. 罗雪兰,陈伟,莫国君,杨鹏,欧和生. 现代生物医学进展. 2017(08)
[2]内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用[J]. 李玉媚,王辉,张文宇,陈伟,胡楠,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(07)
本文编号：2899923
【文章来源】：生物工程学报. 2019年02期 第290-297页 北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
显微镜下观察到hUCMS的转染情况
ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程学报ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn294图2MTT检测27nt-miRNA对细胞活力影响Fig.2MTTdetectstheeffectof27nt-miRNAoncellviability.xs.n=3.*P<0.05vs.NC.P<0.05)，而Anti-27nt-miRNA组升高18.07%(0.83±0.03vs.0.98±0.07，P<0.05)。以上结果提示，27nt-miRNA抑制hUCMSC分化后细胞的活力。2.327nt-miRNA对VSMC分化标志物SM22α表达的影响用免疫细胞化学染色方法(ICC)检测分化后各组细胞中的VSMC特异性蛋白SM22α的表达量，如图3所示，SM22α蛋白主要表达于细胞胞浆，阳性染色呈棕黄色颗粒。运用IPP6.0软件对SM22α蛋白表达量进行计算：平均光密度(Meanopticaldensity)越大，SM22α蛋白表达越高。与阴性对照NC组比较，27nt-miRNA组SM22α表达量增加63.64%(0.22±0.02vs.0.36±0.04，P<0.05)；而Anti-27nt-miRNA组SM22α表达量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。结果提示，27nt-miRNA促进了VSMC分化标志物SM22α表达。2.4RT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA的影响用RT-PCR检测分化后各组细胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表达水平(图4)。与阴图3免疫组化检测27nt-miRNA对细胞SM22α蛋白表达的影响Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.图4PT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA表达的影响Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexp
SM22α表达量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。结果提示，27nt-miRNA促进了VSMC分化标志物SM22α表达。2.4RT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA的影响用RT-PCR检测分化后各组细胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表达水平(图4)。与阴图3免疫组化检测27nt-miRNA对细胞SM22α蛋白表达的影响Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.图4PT-PCR检测27nt-miRNA对SMAmRNA和SM22αmRNA表达的影响Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexpressionofSMAmRNAandSM22αmRNAwasdetectedbyRT-PCR.xs.n=3.*P<0.05vsNC.性对照NC组比较，27nt-miRNA组的SM22αmRNA表达量增加31.40%(0.86±0.03vs.1.13±0.08，P<0.05)、SMAmRNA表达量上升25.00%(0.72±0.03
【参考文献】：
期刊论文
[1]27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响[J]. 罗雪兰,陈伟,莫国君,杨鹏,欧和生. 现代生物医学进展. 2017(08)
[2]内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用[J]. 李玉媚,王辉,张文宇,陈伟,胡楠,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(07)
本文编号：2899923
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