贻贝抗菌肽Myticin A的克隆表达及生物学活性研究

发布时间：2020-12-13 02:13

　　近年来在海洋软体动物贻贝中发现了新的抗菌肽家族。该家族是由特定基因编码的一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽，根据贻贝抗菌肽家族一级结构的不同可以将其分为4组：Defensins，Mytilins，Myticins和Mytimycin。由于抗菌肽天然产量低，合成抗菌肽的价格又太昂贵，因此应用基因工程技术对其进行克隆与表达，将是研究和开发利用抗菌肽的一条有效途径。 MyticinA是贻贝抗菌肽Myticins中的一种，含有40个氨基酸，对革兰阳性菌有抑制作用，但对革兰阴性菌和真菌的抑制作用不明显。本课题选择MyticinA为研究对象，首先从贻贝体内应用RT-PCR方法获得抗菌肽Myticin A基因，然后将其克隆到毕赤酵母表达载体中，获得的MyticinA酵母工程菌能表达贻贝抗菌肽MyticinA，对表达样品进行纯化和活性研究。 研究的主要内容： 1、MyticinA基因的克隆和重组载体pMD18-MyticinA的构建； 2、重组表达载体pPIC9K-Myticin A的构建； 3、MyticinA在毕赤酵母工程菌GS115／pPIC9K-MyticinA中的... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

一mRNA的电泳鉴定Figl一3EleetroPhoresisresultsofto妞1mRNAane、rensaeoou

一185一5写图1一mRNA的电泳鉴定Figl一3EleetroPhoresisresultsofto妞1mRNALanel、2di价rentsamPleofbodyfiuid2.MyticinAcDNA的合成、基因片段的PCR扩增、克隆及序列分析以0119。(dT)18为引物，以贻贝的mRNA为模板，用逆转录试剂盒合成cDNA，进行PCR扩增，获得136bp的特异扩增条带(图1一4)，将PCR产物胶回收后，克隆于pMD18一T上，转化大肠杆菌JMlog

抗菌肤Myticin人的克隆表达及生物学活性研究第一部分3.克隆的筛选和鉴定上述获得的转化子经华诺生物公司进行DNA序列测定(图1一5)，结果证明，获得含有MyticinA基因序列的重组质粒pMD18一MyticinA，获得的MyticinA基因序列与天然产物MyticinA基因完全相同[’l。图1一5ph4D18一M夕ticinA序列测定图Figl一5DNASequeneeanalysisofPMD18一MytieinA4.pPIeg一MytieinA的筛选与鉴定含MytieinA基因的Xhol/EeoRI酶切片断与载体ppICg的众01/EeoRI片断连接，转化大肠大肠杆菌ToP10，得到转化子，其质粒DNA经酶切电泳鉴定，筛选重组质粒，结果如图1一6所示。1号泳道为质粒pPICg;2号泳道为质粒pPICg经劝。I和EcoRI酶切;3号泳道为重组质粒pPICg一MyticinA经xhol和EcoRI酶切。由图可见，众。I尼coRI可切下一条清晰的136bP的小片断和一条大片断

【参考文献】：
期刊论文
[1]镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究[J]. 任绪义,周雍,张建鹏,冯伟华.  生物化学与生物物理进展. 2002(05)
[2]内源性抗生素肽──天然免疫的重要介质[J]. 王伯瑶,吴崎.  生命科学. 1999(S1)



本文编号：2913699