HLA四聚体复合物检测系统的构建及初步鉴定

发布时间：2020-12-15 19:20

　　抗原特异性细胞毒性T 淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs）的鉴定是研究CTL疫苗的基础。定量分析抗原特异性T细胞能为免疫应答的发生过程提供重要的信息。传统的鉴定方法费时费力,敏感性低,近年来出现了一种新的检测方法,即可溶性HLA肽四聚体方法。实验表明,该方法克服已有检测手段的缺点和局限性,这种四价的重组分子在体外可有效标记T细胞抗原识别受体（TCR）,并适用于流式细胞仪检测CTLs,由于该技术应用原核表达重组蛋白,其来源容易,仅需不同的抗原肽就可制备重组分子,因此近期得到了广泛应用。本实验旨在国内率先建立可溶性HLA-A2-CEA四聚体检测系统,为肿瘤的细胞免疫机制研究提供一个方便、准确的研究平台。研究内容如下:一、PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因成功建立相对简单经济的检测HLA-A*0201等位基因的方法,利用位点特异性引物进行2-3次PCR扩增,结合PCR产物测序即可快速筛选HLA-A*0201阳性的个体,满足我们所构建的HLA-A2表位肽四聚复合物检测系统进一步实验的需要。本研究不仅创建了筛选特定等位基因——HLA-... 

【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

2细胞株HLA-A位点扩增图

1 T2 细胞株 HLA-A 位点扩增图 图 2 T2 细胞株 HLA-A2 位点扩增 30 个临床血样并设立对照 30 份血样设立阴性对照，以确定的 PCR 反应条件筛选出 7 份 HLA性产物共同收集电泳（见图 3~5）。986bp1000bp10 9 8 7 6 5 4 3 2 1100bp DNAMarker阴性对照T2 细胞株 HLA-A 位点扩增（引物 P1、P2）1. 100bp DNAMarker2. 阴性对照3. T2 细胞株 HLA-A2 位点扩增4. T2 细胞株 HLA-A2 位点扩增

-A 位点扩增图 图 2 T2样并设立对照阴性对照，以确定的 PCR 反应条集电泳（见图 3~5）。500bp200bp10 9 8 7 6 5 4 3 2 1er 位点扩增（引物 P1、P2）1. 100bp 2. 阴性对3. T2 细胞4. T2 细胞

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组包涵体蛋白质的折叠复性[J]. 冯小黎.  生物化学与生物物理进展. 2001(04)
[2]蛋白质复性[J]. 史晋辉.  生命的化学. 2000(06)
[3]地高辛标记PCR-SSOP法进行HLA-A*02等位基因检测[J]. 翟宁,韩秀萍,贺卫东,宋芳吉.  中国医科大学学报. 2000(03)
[4]绿色荧光蛋白与H-2Kb融合基因的构建及表达[J]. 钱书兵,陈诗书.  中华微生物学和免疫学杂志. 2000(03)



本文编号：2918781