骨膦脂质体的制备及诱导巨噬细胞凋亡的初步研究

发布时间：2020-12-16 00:25

　　目的 利用薄膜法制备携带骨膦药物的载体—脂质体，初步探讨骨膦脂质体诱导巨噬细胞凋亡的作用，为有关巨噬细胞的功能研究及临床相关疾病的治疗，提供新的技术方法和实验论据。 方法 本试验包括(一)骨膦脂质体的制备：先利用旋转蒸发仪，将溶解卵磷脂和胆固醇的氯仿，负压条件下旋转蒸发去除，在瓶的内壁上形成一层薄膜即脂质体。然后分别加入不同的液体(PBS液、骨膦液)，低速旋转溶下瓶壁上的脂质体，分别制备出空脂质体和骨膦脂质体。(二)用骨膦脂质体在小鼠体外、体内不同时间段分别作用腹腔巨噬细胞，然后用抗单链DNA抗体对凋亡的巨噬细胞进行免疫组化染色，用琼脂糖凝胶电泳技术对凋亡的巨噬细胞DNA进行梯状带检测，对比观察和分析不同时间巨噬细胞凋亡的规律。 结果 (1) 利用薄膜法制备的脂质体能够包封骨膦药物，且能够将骨膦导入巨噬细胞并诱导相应细胞发生凋亡。(2) 骨膦脂质体作用体外的腹腔巨噬细胞不同时间段的免疫组化染色。结果显示：0小时未发现凋亡细胞，3小时可见巨噬细胞凋亡，凋亡的细胞核呈现深棕黄色，未凋亡的巨噬细胞的细胞核呈现蓝色，凋亡阳性及凋亡阴性的着色特征与胸腺细胞模型凋亡染色结果一致。0、3... 

【文章来源】：潍坊医学院山东省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

空脂质体光镜下观察脂质体呈大小不等的囊状，个别多室脂质体的脂质双层间隙明显(、1000)

上从乳白色不透明变为乳白色澄清透明。用PBS液清洗、离心，使骨嶙脂质体再一次悬浮于4而的PBS液中。超声前的空脂质体的镜下形态见图l，骨嶙脂质体的镜下形态见图2(高倍镜 x400)。经超声的空脂质体和骨磷脂质体的体积明显变小，镜下可见不到脂质体结构。图1空脂质体光镜下观察脂质体呈大小不等的囊状，个别多室脂质体的脂质双层间隙明显(、 1000)。

图2骨嶙脂质体呈大小不等的囊状，从不同的角度观看个别多室脂质体的磷脂双层较明显(x1000)。、小鼠胸腺细胞凋1雏翅的用抗ssDNA抗体免疫组化染色，地塞米松诱导3小时和6小时后凋!叮内胸脸胞核呈现深棕黄色，染色质浓聚、附边，细胞核呈新月状、帽状或染色质中聚，中阴性细胞核呈蓝色。O小时阴性对照组的胸腺细胞圆而规整，染色质无凝集现，经苏木素复染细胞核呈现蓝色。如图3、图4。


本文编号：2919173