人/禽流感病毒血凝素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

发布时间：2020-12-16 17:54

　　研究目的:构建流感/禽流感及禽流感/流感血凝素融合蛋白的原核表达载体,并在E.coli JM109中表达,检测融合蛋白的生物学活性。实验方法:从H1N1流感病毒接种10日龄的鸡胚尿囊液中以RT-PCR法获得特异性H1基因,以H1基因为模板经PCR反应获得特异性H1A1及H1A2基因,再从质粒pMD18-T/H5中经PCR法获得特异性H5A1及H5A2基因,经重叠延伸PCR（SOE PCR）法连接,构建重组基因H1A1H5A2及H5A1H1A2,分别以T4 DNA连接酶连接7ZTS原核表达载体构建重组质粒7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2。将二者转染E.coli JM109感受态细胞,经IPTG于37℃下诱导4小时,经超声波破碎收获包涵体蛋白。以12%SDS-PAGE电泳及Western blot实验检测,分析表达产物的抗原性。实验结果:测序结果显示获得的H1A1 H5A2、H5A1H1A2基因序列正确,重组载体7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2酶切鉴定结果正确,12%SDS-PAGE电泳显示蛋白表达正确,Western blot检测中重组流感/禽... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
第一章 绪论
    1. 流感血凝素蛋白简介
    2. 大肠杆菌表达系统的特点
    3. 目标蛋白的表达形式和表达部位
    4. 7ZTS 表达载体简介
    5.重叠延伸 PCR（SOE PCR）技术
    6. 表达融合蛋白的意义
    7. 本课题的设计
第二章 仪器和材料
    1. 流感病毒血凝素蛋白全长基因（H1 基因）
    2. 禽流感病毒血凝素蛋白全长基因（H5 基因）
    3. 引物
    4.载体与菌株
    5. 主要分子生物学试剂
    6. 主要生化及化学试剂
    7. 试剂盒
    8.主要仪器和设备
第三章 方法
    1. 人流感/禽流感血凝素融合蛋白在大肠杆菌中的表达
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大肠杆菌中的表达
第四章 结果
    1.人流感/禽流感血凝素重组蛋白在大肠杆菌中的表达
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大肠杆菌中的表达
第五章 讨论
    1.大肠杆菌表达系统的优点
    2.本实验 PCR 及 SOE PCR 法获取目的基因的过程中的一些问题
    3.融合蛋白在大肠杆菌中的表达部位和表达形式
    4.血凝素蛋白抗原决定簇的位置
    5.表达条件优化
    6. 本实验对于研究人/禽流感基因工程亚单位杂合疫苗的重要意义
    7. 本实验表达之融合蛋白的其他应用价值
下一步工作
展望
结论
参考文献
中文摘要
Abstract
致谢
导师简介
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]血凝素蛋白裂解位点对H5亚型禽流感病毒侵入细胞的影响[J]. 刘华雷,王志亮,周滨,陈溥言.  中国预防医学杂志. 2006(05)
[2]运用重叠PCR技术构建HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体[J]. 孙梦宁,薛小平,尹文,吕欣,雷迎峰,韦三华,胡兴斌,杨敬.  生物技术通讯. 2006(01)
[3]H5亚型禽流感病毒HA基因的克隆、表达及其生物学活性的初步分析[J]. 武山,陈晨,雷霆,曹红,陈福勇.  农业生物技术学报. 2005(06)
[4]2005年6-7月全球重大动物疫情综述[J].   中国动物检疫. 2005(08)
[5]PCR-ELISA快速检测高致病性禽流感病毒方法的建立[J]. 亢文华,郝俊峰,张仲秋,宁宜宝,赵德明.  中国畜牧兽医. 2005(06)
[6]禽流感疫苗研究进展[J]. 霍惠玲,王增利,高丰,米振杰.  动物医学进展. 2005(05)
[7]禽流感病毒血凝素基因的研究进展[J]. 杨志刚,陈阿琴,俞颂东,方维焕.  中国兽医科技. 2005(04)
[8]禽流感血凝素基因的原核表达及其在H9亚型诊断中的应用[J]. 张瑞华,金梅林,王贵华,喻正军,赵思婷,李红超,谭亚娣,陈焕春.  生物工程学报. 2005(02)
[9]流感病毒分子生物学研究进展[J]. 潘南胜.  湖北预防医学杂志. 2004(04)
[10]禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达[J]. 张芳芳,刘光亮,姜永萍,陈化兰,陈怀涛.  动物医学进展. 2004(04)



本文编号：2920543