胆红素氧化酶的分离纯化及其性质的研究

发布时间：2020-12-16 22:00

　　露湿漆斑菌发酵4天后，从发酵液中通过盐析、透析浓缩、SephadexG—100凝胶柱层析，分离纯化出胆红素氧化酶，通过SDS-聚丙烯酰胺电泳鉴定，显示为一条带，分子量为68kDa左右。通过紫外诱变选育到两株产酶能力稍高的菌株，其产酶能力是原先的1.5～2倍。该酶在37℃以胆红素为底物的Km值为150μmol／L，最适反应温度为50℃，从60℃开始酶的稳定性变差。该酶在pH7.5时酶促反应最快，酸碱稳定性较高，金属离子对酶促反应有很大影响，EDTA、尿素等能提高酶促反应。利用胆红素氧化酶可用来测定胆红素含量，进行总胆红素测定实验时表明该酶用于诊断具有线性范围较宽、准确性和精密度都较好，可为黄疸等肝胆疾病的诊断提供可靠的依据。 

【文章来源】：南京理工大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 引言
    1.1 生物技术和医学诊断
    1.2 酶诊断试剂
    1.3 胆红素的性质和测定方法
        1.3.1 胆红素的性质
        1.3.2 胆红素的测定方法
    1.4 胆红素氧化酶的研究概况
        1.4.1 胆红素氧化酶的来源
        1.4.2 胆红素氧化酶组成和性质
        1.4.3 胆红素氧化酶的其它应用
        1.4.4 胆红素氧化酶的分子生物学研究进展
    1.5 本课题的研究思路和意义
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 生化试剂
        2.1.2 其他化学试剂
        2.1.3 常用溶液及配法
        2.1.4 仪器设备
        2.1.5 菌种来源
    2.2 方法
        2.2.1 培养基的制作
        2.2.2 培养方法
        2.2.3 胆红素氧化酶的酶活测定
        2.2.4 胆红素氧化酶的分离纯化
        2.2.5 胆红素氧化酶性质的研究
        2.2.6 胆红素氧化酶测定总胆红素的质量评价
        2.2.7 菌株的紫外诱变
3 结果与分析
    3.1 菌株的培养
        3.1.1 产酶菌的观察
        3.1.2 发酵培养的分析结果
    3.2 胆红素氧化酶的分离纯化
    3.3 胆红素氧化酶的性质初步研究
        3.3.1 胆红素氧化酶的Km值
        3.3.2 胆红素氧化酶的最适pH和酸碱稳定性
        3.3.3 胆红素氧化酶的反应最适温度和热稳定性
        3.3.4 几种金属离子和有机物对酶活的影响
    3.4 胆红素氧化酶测定总胆红素的质量评价
        3.4.1 线性范围
        3.4.2 准确度与精密度实验
    3.5 紫外诱变结果
4 讨论
    4.1 最佳发酵时间的确定
    4.2 胆红素氧化酶酶活测定
    4.3 胆红素氧化酶的分离纯化
    4.4 胆红素氧化酶的鉴定
    4.5 胆红素氧化酶的性质研究
    4.6 胆红素氧化酶用于测定总胆的质量评价
    4.7 菌株的紫外诱变实验
    4.8 胆红素氧化酶的研究前景
结论
致谢
参考文献



本文编号：2920849