骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用
发布时间：2020-12-20 19:20
目的探讨骨形态发生蛋白（BMP）4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用。方法取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢,采用两步酶消化法,分离纯化卵母细胞,进行原代培养。将卵母细胞分为3组:正常对照组（Con组）、添加重组人BMP4组（BMP4组）、添加BMP4和BMP4抑制剂6-{4-[2-（1-呱啶基）乙氧基]苯基}-3-（4-吡啶基）吡唑并（1,5-A）嘧啶（dorsomorphin）组（BMP4+抑制剂组）。采用TUNEL法,检测BMP4对卵母细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色与实时定量PCR,检测BMP4对卵母细胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、ckit及foxo3a表达的影响。采用RNA干扰技术、转染sohlh2质粒和LY294002处理,探讨BMP4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控机制。结果 TUNEL结果显示,BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于Con组（P<0.05）和BMP4+抑制剂组（P<0.05）;加入BMP4可明显促进细胞Smad入核,上调sohlh2和c-kit表达,抑制foxo3a入核;转染sohlh2 siR...
【文章来源】：解剖学报. 2014年03期 北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
BMP4处理后各组卵母细胞凋亡的比例分析
虰MP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);c-kit的表达主要分布于卵母细胞的胞质和细胞膜，细胞膜阳性着色更明显，BMP4组c-kit阳性表达也高于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);BMP4组卵母细胞胞核内foxo3a的阳性表达明显低于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3，4A，4B)。2.2BMP4对卵母细胞中sohlh2、c-kit及foxo3amＲNA表达的影响培养48h后BMP4组的sohlh2和c-kit基因表达明显高于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);foxo3a在3组间的表达无明显差别(图4C)。图4BMP4影响卵母细胞p-Smad、sohlh2、c-kit、Foxo3a蛋白及mＲNA水平的表达A为卵母细胞sohlh2、c-kit平均吸光度比较;B为卵母细胞p-Smad、foxo3a入核比例;C为实时定量PCＲ检测卵母细胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表达水平;与Con组比较，*P＜0.05，与BMP4组比较，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group图6Sohlh2siＲNA转染后凋亡卵母细胞比例分析与siCon组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与siCon+BMP4组比较，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA转染后卵母细胞凋亡情况细胞转染sohlh2siＲNA24h后，实时定量PCＲ结果显示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)为有效的sohlh2siＲNA
胞sohlh2、c-kit平均吸光度比较;B为卵母细胞p-Smad、foxo3a入核比例;C为实时定量PCＲ检测卵母细胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表达水平;与Con组比较，*P＜0.05，与BMP4组比较，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group图6Sohlh2siＲNA转染后凋亡卵母细胞比例分析与siCon组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与siCon+BMP4组比较，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA转染后卵母细胞凋亡情况细胞转染sohlh2siＲNA24h后，实时定量PCＲ结果显示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)为有效的sohlh2siＲNA，sohlh2siＲNA(1)的干扰效果更为明显，因此选sohlh2siＲNA(1)以下实验用的小干扰ＲNA。TUNEL结果显示，与siCon组比较，siCon+BMP4组卵母细胞凋亡数量显著减少(P＜0.05)，siSohlh2组凋亡的卵母细胞明显增加(P＜0.01);siSohlh2+BMP4组卵母细胞凋亡数量显著高于siCon+BMP4组(P＜0.01)(图5，6)。免疫组织化学结果显示，与siCon组比较，siSohlh2组Sohlh2和
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨形态发生蛋白-4对人始基卵泡的作用[J]. 苏宁,李予,王文军,麦美琪,杨冬梓,康佳丽,张清学. 中山大学学报(医学科学版). 2008(06)
[2]Foxo3a转录因子参与卵母细胞的凋亡[J]. 陏旭霞,傅玉才,罗丽莉,郭宪国,钱元恕,许锦阶. 中国现代医学杂志. 2007(12)
[3]骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达[J]. 范晓棠,黄云剑,蔡文琴,徐海伟,张金海. 解剖学报. 2003(06)
本文编号：2928413
【文章来源】：解剖学报. 2014年03期 北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
BMP4处理后各组卵母细胞凋亡的比例分析
虰MP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);c-kit的表达主要分布于卵母细胞的胞质和细胞膜，细胞膜阳性着色更明显，BMP4组c-kit阳性表达也高于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);BMP4组卵母细胞胞核内foxo3a的阳性表达明显低于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3，4A，4B)。2.2BMP4对卵母细胞中sohlh2、c-kit及foxo3amＲNA表达的影响培养48h后BMP4组的sohlh2和c-kit基因表达明显高于Con组和BMP4+抑制剂组，差异有统计学意义(P＜0.05);foxo3a在3组间的表达无明显差别(图4C)。图4BMP4影响卵母细胞p-Smad、sohlh2、c-kit、Foxo3a蛋白及mＲNA水平的表达A为卵母细胞sohlh2、c-kit平均吸光度比较;B为卵母细胞p-Smad、foxo3a入核比例;C为实时定量PCＲ检测卵母细胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表达水平;与Con组比较，*P＜0.05，与BMP4组比较，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group图6Sohlh2siＲNA转染后凋亡卵母细胞比例分析与siCon组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与siCon+BMP4组比较，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA转染后卵母细胞凋亡情况细胞转染sohlh2siＲNA24h后，实时定量PCＲ结果显示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)为有效的sohlh2siＲNA
胞sohlh2、c-kit平均吸光度比较;B为卵母细胞p-Smad、foxo3a入核比例;C为实时定量PCＲ检测卵母细胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表达水平;与Con组比较，*P＜0.05，与BMP4组比较，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group图6Sohlh2siＲNA转染后凋亡卵母细胞比例分析与siCon组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与siCon+BMP4组比较，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA转染后卵母细胞凋亡情况细胞转染sohlh2siＲNA24h后，实时定量PCＲ结果显示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)为有效的sohlh2siＲNA，sohlh2siＲNA(1)的干扰效果更为明显，因此选sohlh2siＲNA(1)以下实验用的小干扰ＲNA。TUNEL结果显示，与siCon组比较，siCon+BMP4组卵母细胞凋亡数量显著减少(P＜0.05)，siSohlh2组凋亡的卵母细胞明显增加(P＜0.01);siSohlh2+BMP4组卵母细胞凋亡数量显著高于siCon+BMP4组(P＜0.01)(图5，6)。免疫组织化学结果显示，与siCon组比较，siSohlh2组Sohlh2和
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨形态发生蛋白-4对人始基卵泡的作用[J]. 苏宁,李予,王文军,麦美琪,杨冬梓,康佳丽,张清学. 中山大学学报(医学科学版). 2008(06)
[2]Foxo3a转录因子参与卵母细胞的凋亡[J]. 陏旭霞,傅玉才,罗丽莉,郭宪国,钱元恕,许锦阶. 中国现代医学杂志. 2007(12)
[3]骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达[J]. 范晓棠,黄云剑,蔡文琴,徐海伟,张金海. 解剖学报. 2003(06)
本文编号：2928413
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