人P选择素胞外区Lectin-EGF片段的基因克隆及单链抗体初筛

发布时间：2020-12-28 22:14

　　P选择素（CD62P、PADGEM、GMP140）是细胞粘附分子选择素家族成员，主要参与介导白细胞与内皮细胞的起始粘附，与免疫损伤、炎症反应、血栓形成、淋巴细胞再循环等有密切联系。 本研究从人血小板中提取总RNA，经RT-PCR得到P-选择素cDNA基因，用PCR方法扩增其中的Lectin-EGF片段，并将其克隆到原核表达载体PBV220中，通过酶切，PCR和基因序列分析确定重组入载体的片段为目的基因的核苷酸序列。再将其转化宿主菌DH5α，以包涵体形式表达人P-选择素胞外区Lectin-EGF片段蛋白，蛋白经变性、复性后分别配置成40ng／ml、30ng／ml、20ng／ml、10ng／ml的PBS溶液，包被于组织培养皿上，并对抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库进行四轮筛选，再以150ng每孔包被酶标板，筛选到3个阳性克隆，抽提其质粒进行PCR检测可扩增出780bp特异条带，与单链抗体基因预计值相符，pET20b（+）系统成功表达了筛选到的单链抗体，为今后进一步研究打下基础。 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：34 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Lectin一EGF基因克隆的琼脂糖凝胶电泳分析

GF基因表达产物的SDS一PAG中、低分子量Marker(94KDKD、14KD)2.诱导2h3.3、讨论一140、cD62p、PADGEM)管状(weibelpalade)小体全长789个氨基酸。N末端素样结构域(lectin一likedomainmain)和9个补体调节蛋白4个氨基酸构成跨膜区、35，人们对其生物学功能与分

的基因克隆及单链抗体初筛与表达载体Pet20b(+)连接，达sh，留取诱导前样本以及2、结果n一EGF片段包涵体的分离、洗后去除了细菌中大量的杂蛋白然后缓慢复性，透析，Bradford23


本文编号：2944475