日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48可变区基因克隆及双链抗体的构建、表达与初步鉴定

发布时间：2020-12-31 21:37

　　管晓虹等（1991）建立了一株日本血吸虫单克隆抗独特型抗体（anti-id），命名为NP30，经鉴定系肠相关抗原（GAA）的内影像anti-id，与可溶性虫卵抗原（SEA）及膜相关抗原（MAA）有部分交叉反应。NP30既可替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断，又具有较好的抗感染免疫和抗病免疫作用。为分离、纯化NP30模拟的抗原分子，应用NP30免疫BALB／c小鼠，建立了1株抗NP30的抗抗独特型抗体（anti-anti-id），定名为NP48。NP48的Ig同型为IgG2b，与可溶性成虫抗原（SWAP）和SEA的ELISA反应均为阳性。为了拓展NP48—这株本课题组有自主知识产权的抗体的应用范围，如将来构建用于诊治血吸虫病的双功能抗体，本课题在参照国内外相关研究的基础上，设计并完成了以下研究内容： 1．设计通用引物，扩增单克隆抗体NP48的可变区基因，经亚克隆、测序鉴定其序列，与多个数据库比对，进行序列分析，排除假基因。 2．设计引物，扩增NP48双链抗体基因，经亚克隆、测序鉴定其序列。构建NP48双链抗体基因的原核分泌型表达系统，分离可溶性表达产物与包涵体，鉴定其中目... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

vL、vH基因扩增产物1.0%琼脂糖凝胶电泳结果

电泳双链抗体基因(DR/Dp)的Plll酶切位点)，约36lbP:lll酶切位点)，约349bp;HI，EeoRI酶切位点)，约385bp;约731bP:约719bp·克隆重组与测序结果测序(图2)，证明构建的双链杭40

图4.1%琼脂糖凝胶电泳pBAD/g川和pM018-T-DR乌双酶切及回收纯化l:PBAD/g川2:DL15，000DNAMarker3:OL20()0DNAMarker4:PMD18一T-DR/(EeoRI+Hind111)5:PMD18一T-D武EcoRI+Hind111)图5.1%琼脂糖凝胶电pBAD/glll一DROp双酶切鉴定l:DL巧，000DNAMarker2:DL2000ONAMarker3:PBAD龟111一DR/(EeoRI+Hind14:PBAD德111一D夕(EcoRI+Hind13.2重组蛋白的诱导表达和初步鉴定①pBAD/g111一DR、pBAD/9111一Dp的表达用左旋阿拉伯糖诱导目的蛋白的表达，以空载质粒表达菌为对照，DR与D。在分子量约27KD的位置均有明显的表达条带，表达量约为

【参考文献】：
期刊论文
[1]治疗用抗体:思路与策略[J]. 李春英,王刚,高天文,刘玉峰.  医学与哲学. 2001(09)
[2]日本血吸虫单克隆anti-anti-id的建株及初步鉴定[J]. 王祝鸣,冯振卿,仇镇宁,李芸茜,管晓虹.  中国血吸虫病防治杂志. 2001(04)
[3]日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP41的建株及初步鉴定[J]. 李芸茜,仇镇宁,冯振卿,管晓虹.  中国血吸虫病防治杂志. 2001(03)
[4]抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用[J]. 冯振卿,朱荣,李玉华,仇镇宁,李芸茜,王祝鸣,薛婉芬,管晓虹.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(01)
[5]基因工程双功能抗体的分子设计及表达[J]. 操敏.  国外医学(免疫学分册). 2000(05)
[6]日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对山羊的保护性免疫作用[J]. 冯振卿,李玉华,仇镇宁,李芸茜,王祝鸣,刘宁波,李祥瑞,许立新,吴观陵,管晓虹.  中华医学杂志. 2000(06)
[7]基因工程抗体的新种类—双链抗体[J]. 毛春生,李季枝.  国外医学(免疫学分册). 2000(02)
[8]日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导保护性免疫[J]. 冯振卿,仇镇宁,李玉华,朱昌亮,薛婉芬,管晓虹,吴观陵.  上海免疫学杂志. 1997(05)
[9]单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究[J]. 吴宜琴,陶如华,仇镇宁,罗建平,管晓虹,吴观陵,赵慰先.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1993(03)
[10]日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定[J]. 管晓虹,仇镇宁,马磊,陶如华,吴宜琴,河清,吴观陵,赵慰先.  寄生虫学与寄生虫病杂志. 1991(04)



本文编号：2950356