甲型肝炎病毒的提取及免疫学性质分析
发布时间：2021-01-03 02:22
目的建立甲型肝炎病毒（hepatitis A virus, HAV）的提取方法,了解和掌握HAV的免疫学性质。方法利用人胚肺二倍体细胞培养并收获HAV,用层析纯化等方法提取HAV,然后通过抗原检测、免疫电镜检查以及小鼠免疫试验对HAV的免疫学性质进行检测和分析。结果利用层析纯化等方法提取HAV,抗原回收率达84%以上,蛋白去除率达97%以上,电镜及免疫电镜检查可以观测到典型的HAV以及HAV+IgM抗原抗体免疫复合物和HAV+IgG抗原抗体免疫复合物,免疫小鼠抗体阳转率为100%。结论利用层析纯化等方法可以对HAV进行有效提取,提取的HAV具有良好的免疫反应性和免疫原性。
【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2019年04期
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
阴离子交换层析图谱注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl
5、1．00mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果均为阴性(－)，见表2。表明HAV抗原主要存在于0．50、0．75mol/LNaCl洗脱峰中。注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl。图1阴离子交换层析图谱Fig．1Theprofileforanion-exchangechromatography2．3阴离子交换层析和分子筛层析纯化试验样品进行第二次阴离子交换层析，分别使用0．02mol/LPB、0．25mol/LNaCl、0．75mol/LNaCl溶液进行洗脱，形成3个洗脱峰，见图2;分别收取各个洗脱峰表2阴离子交换层析抗原含量检测结果Tab．2Theantigencontentsextractedbyanion-exchangechromatography洗脱顺序洗脱液洗脱峰中抗原含量(EL．U．/mL)①0．02mol/LPB缓冲液(－)②0．25mol/LNaCl溶液(－)③0．50mol/LNaCl溶液640④0．75mol/LNaCl溶液1280⑤1．00mol/LNaCl溶液(－)注:⑥．0．02mol/LPB;⑦．0．25mol/LNaCl;⑧．0．75mol/LNaCl。图2第二次阴离子交换层析图谱Fig．2Theprofileforsecondanion-exchangechromatography微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·92·
溶液，进行抗原含量检测，结果显示:阴离子交换层析后，在0．75mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果为2560EL．U．/mL，在0．02mol/LPB和0．25mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果为阴性(－)。再将0．75mol/LNaCl洗脱峰进行分子筛层析纯化，使用0．01mol/LPBS进行洗脱，形成2个洗脱峰，见图3;分别收取各个洗脱峰溶液，进行抗原含量检测，结果显示:分子筛层析经0．01mol/LPBS洗脱后，第1峰中抗原检测结果为1280EL．U．/mL，第2峰中抗原检测结果为阴性(－)，见表3。注:⑨．0．01mol/LPBS洗脱第1峰;⑩．0．01mol/LPBS洗脱第2峰。图3分子筛层析图谱Fig．3Theprofileforgelfiltration表3第二次阴离子交换层析和分子筛层析抗原含量检测结果Tab．3Theantigencontentsextracedbysecondanion-exchangechromatographyandgelfiltration层析种类洗脱峰抗原含量(EL．U．/mL)阴离子交换层析0．02mol/LPB洗脱峰(－)阴离子交换层析0．25mol/LNaCl洗脱峰(－)阴离子交换层析0．75mol/LNaCl洗脱峰2560分子筛层析0．01mol/LPBS洗脱1峰1280分子筛层析0．01mol/LPBS洗脱2峰(－)2．4HAV抗原样品的制备使用的3批病毒收获物的体积分别为200、400、600mL;抗原含量均为10240EL．U．/mL;蛋白质质量浓度分别为866．9、773．1和960．6μg/mL。制备的3批HAV抗原试验样品分别为HAVAgS01、HAVAgS02和HAVAgS03;体积分别为1350、2850和4200mL;抗原含量均为1280EL．U．/mL;蛋白质质量浓度分别为2．7、2．4和2．9μg/mL。抗原回收率分别为84．38%、89．06%和87．50%;蛋?
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲型肝炎疫苗接种的流行病学效果评价[J]. 李淑芳,左志平,李浩,李然,娄红敏. 医学动物防制. 2016(02)
[2]甲型肝炎疫苗应用后甲型肝炎流行特征的变迁[J]. 邱宁,刘学恩,庄辉. 中国病毒病杂志. 2012(05)
本文编号：2954125
【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2019年04期
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
阴离子交换层析图谱注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl
5、1．00mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果均为阴性(－)，见表2。表明HAV抗原主要存在于0．50、0．75mol/LNaCl洗脱峰中。注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl。图1阴离子交换层析图谱Fig．1Theprofileforanion-exchangechromatography2．3阴离子交换层析和分子筛层析纯化试验样品进行第二次阴离子交换层析，分别使用0．02mol/LPB、0．25mol/LNaCl、0．75mol/LNaCl溶液进行洗脱，形成3个洗脱峰，见图2;分别收取各个洗脱峰表2阴离子交换层析抗原含量检测结果Tab．2Theantigencontentsextractedbyanion-exchangechromatography洗脱顺序洗脱液洗脱峰中抗原含量(EL．U．/mL)①0．02mol/LPB缓冲液(－)②0．25mol/LNaCl溶液(－)③0．50mol/LNaCl溶液640④0．75mol/LNaCl溶液1280⑤1．00mol/LNaCl溶液(－)注:⑥．0．02mol/LPB;⑦．0．25mol/LNaCl;⑧．0．75mol/LNaCl。图2第二次阴离子交换层析图谱Fig．2Theprofileforsecondanion-exchangechromatography微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·92·
溶液，进行抗原含量检测，结果显示:阴离子交换层析后，在0．75mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果为2560EL．U．/mL，在0．02mol/LPB和0．25mol/LNaCl洗脱峰中抗原检测结果为阴性(－)。再将0．75mol/LNaCl洗脱峰进行分子筛层析纯化，使用0．01mol/LPBS进行洗脱，形成2个洗脱峰，见图3;分别收取各个洗脱峰溶液，进行抗原含量检测，结果显示:分子筛层析经0．01mol/LPBS洗脱后，第1峰中抗原检测结果为1280EL．U．/mL，第2峰中抗原检测结果为阴性(－)，见表3。注:⑨．0．01mol/LPBS洗脱第1峰;⑩．0．01mol/LPBS洗脱第2峰。图3分子筛层析图谱Fig．3Theprofileforgelfiltration表3第二次阴离子交换层析和分子筛层析抗原含量检测结果Tab．3Theantigencontentsextracedbysecondanion-exchangechromatographyandgelfiltration层析种类洗脱峰抗原含量(EL．U．/mL)阴离子交换层析0．02mol/LPB洗脱峰(－)阴离子交换层析0．25mol/LNaCl洗脱峰(－)阴离子交换层析0．75mol/LNaCl洗脱峰2560分子筛层析0．01mol/LPBS洗脱1峰1280分子筛层析0．01mol/LPBS洗脱2峰(－)2．4HAV抗原样品的制备使用的3批病毒收获物的体积分别为200、400、600mL;抗原含量均为10240EL．U．/mL;蛋白质质量浓度分别为866．9、773．1和960．6μg/mL。制备的3批HAV抗原试验样品分别为HAVAgS01、HAVAgS02和HAVAgS03;体积分别为1350、2850和4200mL;抗原含量均为1280EL．U．/mL;蛋白质质量浓度分别为2．7、2．4和2．9μg/mL。抗原回收率分别为84．38%、89．06%和87．50%;蛋?
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲型肝炎疫苗接种的流行病学效果评价[J]. 李淑芳,左志平,李浩,李然,娄红敏. 医学动物防制. 2016(02)
[2]甲型肝炎疫苗应用后甲型肝炎流行特征的变迁[J]. 邱宁,刘学恩,庄辉. 中国病毒病杂志. 2012(05)
本文编号：2954125
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