性病病原体低密度基因芯片的初步研制

发布时间：2021-01-08 17:58

　　目的 采用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术研制性病病原体低密度基因芯片。 方法 将淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、白色念珠菌以及人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）SF2株env基因的种特异性探针加尾后固定在尼龙膜上。将上述5种性病病原体的标准菌株提取DNA后采用细菌、真菌以及人类免疫缺陷病毒三组通用引物分别行PCR扩增，在扩增过程中用Bio-16-dUTP标记扩增产物，将上述扩增产物变性后分别与点有5种探针的尼龙膜反向杂交；将来源于临床的性病病原体标本提取DNA后与上述三组通用引物在一个PCR反应体系内行PCR扩增，扩增过程中用Bio-16-dUTP标记扩增产物，扩增产物变性后与点有5种探针的尼龙膜反向杂交。 结果 对淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体的标准菌株行PCR扩增，均出现520bp长度的DNA片段，对白色念珠菌标准菌株行PCR扩增出现350bp的条带，对HIV-1SF2株env基因行PCR扩增出现167bp长度的DNA片段，敏感性试验可检出20fg的菌体DNA；5种性病病原体的PCR扩增产物，与膜上点有5种探针的尼龙膜杂交，结果在各自特异性探针的位置上出... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 实验仪器
    2.2 材料
    2.3 实验方法
        2.3.1 探针的制备
        2.3.2 实验条件优化
        2.3.3 性病病原体低密度基因芯片的临床应用
3 结果
    3.1 淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、HIV-1SF2 PCR产物克隆后的PCR、酶切电泳鉴定
    3.2 用三套通用引物分别扩增5种标准性病病原体DNAPCR产物电泳图谱
    3.3 反向斑点杂交的结果
    3.4 反向斑点杂交的敏感性
    3.5 PCR反应的广谱性和特异性
    3.6 常规方法与基因芯片法检测临床标本的检出率比较
4 讨论
参考文献
附录1
附录2
综述
综述参考文献
致谢



本文编号：2965045